肺炎嗜衣原体三种不同抗原临床诊断初步应用研究.pdfVIP

肺炎嗜衣原体三种不同抗原的临床诊断初步应用研究 硕士研究生：陈虹亮 导 师：吴移谋 中文摘要 达产物，并分析其免疫活性，比较这三种重组蛋白应用于Cpn临床诊断中的价值， 为制各Cpn感染的快速诊断试剂盒提供实验依据。 AR．39标准株基因组DNA为模板，高保真PCR扩增目的基因 方法：以Cpn 达，SDS．PAGE和Westernblot分析和鉴定表达产物；用谷胱甘肽S．转移酶 (glutathione 白浓度。以纯化的重组蛋白分别免疫新西兰兔，建立间接ELISA法，优化条件 后进行可靠性试验和稳定性试验，分别检测兔血清中特异性抗体效价，分析重组 蛋白的免疫原性；用间接ELISA法和Westemblot分析重组蛋白的免疫反应性。间 83份临床 接ELISA方法与CpnIgG诊断试剂盒(SavyonDiagnostics)平行检i贝t]1 16S rRNA序列特异性引物作为引物)与CpnIgG诊断试剂盒(SavyonDiagnostics) 同时检测60份成人体检血清标本，比较检测结果，综合评价重组蛋白及建立的 PCR法在Cpn临床诊断中的应用价值。 结果：应用PcR法扩增得到目的片段，构建的重组质粒经酶切和测序鉴定证明 其中插入片段为目的基因，经Blast比对测序结果与Genbank上登录序列完全一 致；SDS．PAGE分析显示，在IPTG诱导下，重组工程菌分别表达了相对分子量 4 目的蛋白，目的蛋白在菌体细胞内主要以可溶性形式存在；经GST琼脂糖凝胶FF 亲和纯化获得了纯度在95％以上的重组蛋白。以重组蛋白为包被抗原建立间接 IgG抗 体效价，其滴度分别高达1：6400、1：12800和l：12800以上；用该法对183份呼吸 道感染的病人血清进行检测，将重组蛋白间接ELISA法与以色列Savyon ELISA诊断试剂盒的检测结果进行比较，ELISA法 Dia盟oStics公司SeroCP诩IgG rRNA特异性引物的PCR法及SeroCPTMELISA诊断试剂盒检测结果进行比 IgG rRNA为96．7％)。 95％、Cpn0308为93．3％、16S 结论： 激新西兰兔产生高效价的特异性抗体； 2) GST-Cpn0308具有较好的免疫学活性，在Cpn感染血清学诊断和抗原检测中 诊断试剂盒。 rRNA基因，说 明Cpn存在于外周血中。 关键词：肺炎嗜衣原体；免疫活性；血清学诊断 本课题受以下课题资助： 湖南省科技厅重点专项课题(06FJ2004) ●一 ■ ■ - l … _- ● olthreerecom value binant ComparaUvedmgnostic proteins as on of antigensSerodiagnosisChlamydophilapneumoniae ABSTRACT Objective： Therecombinantvectorof 1 1 from expression Cpn046、CpnO47、Cpn0