酿酒酵母发酵糖类生产酒精的研究现状.pdfVIP

文章编号：1005—376X(2005)02—0160—02 【综g述】 酿酒酵母发酵糖类生产酒精的研究现状 李代昆，张德纯 (重庆医科大学医学检验系临床微生物学教研室，重庆400016) 【关键词】 酿酒酵母；基因工程；糖类；生产工艺；酒精 【中图分类号]R378 文献标识码：A 可再生资源如粮食或植物纤维发酵生产的酒精作为生物 行代谢而产生氧化还原辅因子(NADPH和NAD)的不平衡。 能源来代替或部分代替汽油，可以缓解石油日益枯竭的压力， 将编码真菌的依赖NADPH的D一甘油醛一3一磷酸脱氢酶 同时具有绿色环保的社会效益。酿酒酵母(S．cerevisiae)是传 统的酒精生产菌株，具备良好的工业生产性状，耗糖快、乙醇 戊糖途径中便于NADPH的再生。通过基因工程改造氧化还 耐受力高、对水解糖液中有毒物质抗性强；全序列已测定，遗 原反应而构建的重组菌株在厌氧条件下发酵木糖，木糖醇的 传操作技术也已经成熟。木质纤维素类物质是地球上最主要 聚集和C0：的生成明显降低，酒精的产量和生产率显著提 的可再生资源，木糖是半纤维素的主要组成部分，在植物纤维 3001c) 材料水锵液中占30％左右，是继葡萄糖之后自然界中最丰富 酶和乙醛脱氢酶的外源表达，在酿酒酵母菌株(TMB 的糖分。目前，国内外均以淀粉为主要原料生产酒精，酿酒酵 中构建一条功能性重组磷酸酮醇酶途径，调整碳流量提高 母缺乏分解淀粉所必需的淀粉酶，在发酵过程中淀粉需经蒸 NADH的再氧化，减少了木糖醇的积聚而增加酒精产量 煮、a一淀粉酶液化处理和随后的酸解或酶解(糖化酶)糖化过 25％Ⅲ。 程变成葡萄糖后才能被酵母利用，底物的处理成本占很大比 1．1．5木糖转座子Sedlak等发现木糖转移是木糖发酵的 例。酿酒酵母发酵糖类生产酒精是一个系统工程，生产流程 长，生产工艺复杂，任何环节都可影响酒精生产和酒精产量。 子和相关基因的表达模式。葡萄糖的存在强烈影响木糖转座 现将其研究现状综述如下。 1改造酿酒酵母 1．1构建利用木糖的酿酒酵母 母突变株(RE 1．1．1整合XR(木糖还原酶)和XDH(木糖脱氢酶)的基因HXT7和GAL2等基因编码的转座子转移木糖的有效性，发 现含有HXT7或HXT5的重组菌株RE700A更有效发酵木 XR和XDH以NADPH和NAD+为辅酶共同利用木糖转 化为木酮糖。Chung等将编码XR的基因导入酿酒酵母——8 整合载体和YRp质粒载体，2种表达系统显示出不同的木糖 1．2 构建利用淀粉的酿酒酵母Lipomyces 醇生成模式[1]。与表达YRp—XR的菌株相比，8一XR重组菌株 有丝分裂稳定并通过协作的方式提高表达水平，木糖醇生成 酶活性，2种酶都能利用淀粉作为碳源。Eksteen等构建了含 率提高了L70倍。Jin等通过操纵树干毕赤酵母基因(XYLl 有L．kononenkoae 和XYL2)的表达来改变重组酿酒酵母中木糖代谢的流量∽J。 XYLl整合到染色体，XYL2整合到染色体或转移到多拷贝载五buligera 体；基因受甘油醛一3～磷酸脱氢酶启动子控制。重组菌株的XR 和XDH的活性随XYLl和XYL2的拷贝数的增加而增加， 尤其是XDH活性增加12倍。高XDH活性能减少木糖醇聚 集，增加木酮糖的生成。 于各自自身的启动子和终止子；第3组包含2个双基因盒 1．1．2整合XI(木糖异构酶)的基因XI可直接将木糖转化 5．3．1-5)在酿酒和终止子，后者受控于各自自身的启动子和终止子。这些基因 为木酮糖。Kuyper等证实了当外源XI(EC 酵母中功能性表达，木糖厌氧发酵可生成酒精，而且基本上无