骨髓基质干细胞诱导分化滑膜样细胞移植预防屈肌腱粘连的实验研究.pdfVIP

墨翟弱 …一 怍T 基 础 医 学 骨髓基质干细胞诱导分化滑膜样细胞 移植预防屈肌腱粘连的实验研究 利春叶 吴丽妮 朱肖奇 王爱琴 贾赛雄 (南方医科大学附属深圳宝安医院 广东深圳 518101) 【摘要】目的 探讨移植的骨髓基质干细胞诱导分化的滑膜样细胞是否具有明显的防止屈肌腱粘连的功效。方法 提取兔骨髓基质干 细胞诱导下分化为滑膜样细胞。经鉴定后，将滑膜样细胞移植于大 白兔损伤的跟腱处，术后1、2，4、8周取材，进行大体标本粘连等级评 定，生物力学测试及组织学观察 。结果 对分化的滑膜样细胞鉴定，光镜下 电镜下均符合滑膜细胞结构特征，免疫组化VimentinFEI性， CD68阴性，符合成纤维细胞样滑膜细胞(B型滑膜细胞)的特征。滑膜样细胞移植术后，光镜及扫描电镜发现肌腱表面光滑，被覆大量滑膜 样细胞。同一时相点实验组 同对照组相比粘连明显减轻( 0．05)。结论 骨髓基质干细胞在一定条件下可以诱导分化为滑膜样细胞。 滑膜样细胞移植可以有效的防止肌腱粘连 。 【关键词】骨髓基质干细胞 谤导分化 滑膜样细胞 肌腱粘连 【中图分类号 】R681 【文献标识码 】A 【文章编号】1674--0742(201o)o3(b)-0032-02 1 动物实验材料 方法 统计学分析：所有计量资料均以均数 ±标准差(X± 表示，采 1．1 实验动物 用SPSS11．5软件进行统计学分析，P0．05则表示有统计学意义。 材料及仪器：新西兰大白兔90只，雌雄不限，5～7刷龄，体重2．5kg 计量资料采用t—test，计数 资料采用等级资料 的秩和检验。 左右，其中3只用于提供BMCS以及关节滑液来源，其余用于研究防止 2 结果 肌腱粘连。 2．1 滑膜样细胞的鉴定 1．2 研究方法 BMSCs传代培养初期可见大量悬浮细胞 ，48h后可见有散在纺 MsCs的诱导分化：将MSCs移入含地塞米松1×10mol／L、关 锤形贴壁细胞 ，经多次半量换液后 ，未贴壁细胞逐渐被去除。4d后 节滑液1×10～mol／L、bFGF-23ng／mL、维生素C100mg／L的胎牛 可见成簇 、贴壁 的纺锤形细胞逐渐增多，但仍存在混杂细胞。经多 血清DMEM，诱导MSCs向滑膜细胞分化 ，通过离心 、纯化后鉴定 次传代后，细胞逐渐纯化，并且细胞初期多以集落形式增长，第6 (光镜、透射 电镜以及免疫组化等鉴定)。然后培养扩增备用。 代后细胞呈形态均一 的纺锤形 ，分布均匀。 滑膜样细胞移植：选用84只大白兔 ，每只兔的右后肢作为实验 在bFGF一2、关节滑液等诱导条件下，BMSCs逐渐向滑膜样细 组，左后肢为对照组。将诱导分化的细胞悬液移植入大 白兔右后 胞形态分化 。于4d后散在个别细胞逐渐呈梭型生长。7d后梭型细 肢损伤的跟腱处，术后用管形石膏将下肢固定于膝关节屈曲15。， 胞较前增多，细胞间较少见紧密联接。10d时梭型细胞约 占2／3。随 踝关节背伸l5。，足趾 自然位。 细胞数量增加而逐渐紊乱 ，无明确的方向性排列特征 。14d时长满 检测指标：术后l、2、4、8周取材。第1周每组各3只动物6条跟腱 培养皿底，细胞形态以梭形为主，两极胞突细长，末端多与邻近细 进行大体标本粘连等级L平定、组织学观察(包括光镜和透射 电镜 胞连接并交织成网状 。网间散布有较多小星形或多边形细胞 ，与 观察)；后3周每组各6只动物 12条跟腱 ，随机取6条跟腱进行生物力 梭形细胞紧密连接 。 学测试 ，6条进行大体标本粘连等级评定及组织学观察 。 贴壁法纯化后 ，扩增培养，将纯化的梭型细胞用0．25％胰蛋白