中药对MCAO大鼠脑勿动蛋白-A表达影响.pdfVIP

中药对MCAO大鼠脑勿动蛋白-A表达的影响1 1 2 2 周永红 ，王新陆 ，胡怀强 1.青岛大学医学院中医教研室 山东青岛 266021； 2.山东中医药大学 山东济南 250014 摘 要：目的：研究中药复方对大脑中动脉闭塞（middle cerebral artery occlusion，MCAO）模 型大鼠脑内勿动蛋白-A 的影响，探讨其促进神经发生的作用。方法：30 只大鼠随机分为药物组、病 理模型组、正常对照组 3 组。用 Tamura 法造成 MCAO 大鼠模型，于造模成功后 6 天药物组灌胃给予 中药复方复健片 10g/kg，余二组分别灌胃给予同等量生理盐水， 日1 次，共 2 周。用原位杂交法观 察 MCAO 大鼠脑内勿动蛋白-A 的表达。结果：药物组大鼠脑内勿动蛋白-A 表达明显减弱。结论：中 药复方复健片可显著抑制MCAO 大鼠脑内勿动蛋白-A 的表达，从而促进缺血性卒中神经发生。 关键词：中药；缺血性卒中；勿动蛋白-A 复健片是我们临床治疗缺血性卒中的经验方，具有滋补肝肾作用，是纯中药制剂。 临床研究表明，复健片可有效治疗缺血性卒中，改善患者的神经功能缺损评分、日常生 活活动能力、智能状况和胰岛素抵抗状态，还可增加梗死周围组织及对侧的局部脑血流 [1] 。为探讨其作用机制是否与神经发生有关，我们进行了深入的实验研究。 1 实验材料 1.1 实验动物：普通级健康 Wistar 大鼠 30 只，12 周龄，体重 300±20g，雌雄不限 （山 东省实验动物中心提供）。单笼饲养一周，自由饮水和摄食。饲养室温度 24-25 ℃，相对 温度 7%左右，光照明暗比为 13:11。 1.2 实验仪器：显微手术钻，XSZ-2 型，上海光电公司；双极电凝器，SJ-2 型，上海光 电公司；WT11001R 型电子天平，江苏省常州市万得天平仪器厂；电热恒温水槽，DK-600 型，上海精宏实验设备有限公司；手术显微镜，光学显微镜均为上海医用光学仪器厂产 品；大鼠固定器。 1.3 实验药品及试剂：勿动蛋白-A （Nogo-A ）原位杂交试剂盒购自武汉博士德生物工 程有限公司；戊巴比妥钠购自上海化学试剂采购供应站分装厂；注射用青霉素钠购自山 东鲁抗医药股份有限公司；氯代三苯基四氮唑（红四氮唑，TTC ）购自上海试剂三厂。 2 实验方法 1本课题得到教育部博士学科点基金资助，编号 20040441018 1 2.1 动物分组：实验动物随机分为药物组、病理模型组、正常对照组 3 组，每组 10 只。 模型组和药物组按下述方法制 MCAO 模型，假手术组大鼠行同样开颅术，但不凝闭大 脑中动脉，其余操作同模型组。 2.2 大鼠MCAO模型的制备：按Tamura[2] 的方法稍加改进行右侧近端大脑中动脉电凝 术。麻醉醒后 24h 内出现（1）左侧肢体痛刺激收缩现象消失；（2 ）向左侧倾倒或转圈； （2 ）提尾时左上肢不能向前伸直。具备以上 3 项为MCAO模型复制成功，纳入试验， 进行分组，余者弃之。 2.3 给药方法：药物组灌胃给予复健片 （由山东鲁信药业有限公司生产，主要药物为何 首乌、草决明、桑寄生、海马、淫羊藿等）水溶液10g/kg，余二组分别灌胃给予同等量 生理盐水，日1次，共2周。于造模成功后6d给药，固体饲料和水自由摄取。 2.4 切片制作：实验动物结束喂药、末次观察神经系统症状后，迅速开胸暴露心脏，经 升主动脉插管后，先用100ml生理盐水快速冲洗，随后用4%多聚甲醛磷酸缓冲剂心脏灌 注约30min ，灌毕立即取脑浸入上述固定液1d，常规脱水、浸蜡、包埋。予正中隆起水 平在切片机上行4 μm连续冠状切片备用。 2.5 Nogo-A表达：采用原位杂交法进行观察。（1）石蜡切片常规脱蜡至水。（2 ）30%H O 1