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黄连N-甲基乌药碱-3-羟化酶基因的克隆及序列分析.pdf
and
TraditionalHerbal ·419·
中草菊Chinese Drugs第39卷第3期2008年3月
·药材与资源·
黄连Ⅳ一甲基乌药碱一37一羟化酶基因的克隆及序列分析
放1．
．周嘉裕1’2，彭书明1，雷泞菲1，廖海2，陈
614202)
(1．四川大学生命科学学院，四川成都610064，2．西南交通大学药学院，四川峨眉
chinensis
摘要：目的克隆黄连Coptis N一甲基乌药碱一3
7一羟化
并做序列分析。方法采用RT—PCR方法，以新鲜的黄连嫩叶eDNA为模板，克隆出黄连Ⅳ一甲基乌药碱一3
680
酶基因的全部序列。结果克隆到的基因(命名为CYP8083)全长为1bp，编码一个488个氨基酸残基组成的
多肽。其氨基酸序列与日本黄连、唐松草、罂粟和花菱草的Ⅳ一甲基乌药碱一37-羟化酶的氨基酸序列同源性分别达
有相同功能区域，因而可以参与Ⅳ一甲基乌药碱的3’位羟基化反应。结论黄连N一甲基乌药碱一37一羟化酶基因的成
功克隆为黄连植物中原小檗碱型苄基异喹啉类生物碱的基因工程等研究打下了良好的基础。
关键词：黄连；Ⅳ一甲基乌药碱一3’一羟化酶基因；克隆；序列分析
中国分类号：R282．7 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2008)03—0419—05
Molecularand
cloningsequenceanalysis
in chinensis‘
geneCoptis
ZHOU
Jia—yul“，PENG Hai2，CHEN
Shu—min91，LEINing—feil，LIAO Fan91。
ofLifeScience，Siehuan of
(1．‘College University，Chengdu610064，China；2．CollegePharmacy，
SouthwestUniversity，Emei614202，China)
Jiaotong
Tocloneand theeDNA
Abstract：Objectivesequence 7一hydrox—
from chinensis．MethodsThe
ylase Coptis
with oftenderleafthe
RT—PCReDNA as The eDNAof
amplifiedby library template．Resultsfull—length
(S)一Ⅳ一methylcoclaurine一3 asCYP8083)had1680 withan frame
7一hydroxylase(named bp openreading
ac
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