IGF-1对成兔关节软骨细胞体外增殖影响.pdfVIP

中国医科大学研究生学位论文独创性声明 本人申明所呈交的学位论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及 取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论 文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得我校或 其他教育机构的学位或证书而使用过的材料，与我一同工作的同志对本研 究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示谢意． 申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任． 论文作者签名： 日期： 中国医科大学研究生学位论文版权使用授权书 本人完全了解中国医科大学有关保护知识产权的规定，即：研究生在 攻读学位期间论文工作的知识产权单位属中国医科大学。本人保证毕业离 校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位为中国医科大学，且导师 为通讯作者，通讯作者单位亦署名为中国医科大学．学校有权保留并向国 家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅．学 校可以公布学位论文的全部或部分内容(保密内容除外)，以采用影印、缩 印或其他手段保存论文。 论文作者签名： 指导教师签名： IGF一1对成兔关节软骨细胞体外增殖的影响 目 的 在临床上，由外伤或疾病引起的关节软骨损伤很常见，多为成年人和老 年人，尤其是骨关节炎病，在老年人中更为常见。由于软骨组织中不具有血 管与神经，其损伤后难以自我恢复。区别以往的实验研究对象大多为胎兔 或幼兔关节软骨细胞，我们以成兔的关节软骨细胞为研究对象，在IGF一1 的单独作用下，通过细胞形态学，细胞计数，细胞计量等检测手段，了解单独 应用IGF一1对其增殖的促进作用，为成人关节软骨的体外培养扩增提供理 论基础和临床依据。 材料与方法 1．成年兔关节软骨分离、培养： 取22月龄(属于老龄兔)的日本大耳白兔，处死，片状削取关节软骨， 手术刀将软骨切成1．0ram3大小碎块，消化、过滤、离心，搜集关节软骨细胞， 孵育箱内培养。3天后第一次换液，以后隔Et换液，至细胞85％融合后，胰 酶消化、传代。 2．倒置显微镜下观察软骨细胞生长状况。 3．细胞爬片HE染色光镜下观察软骨细胞形态。 4。MTr比色实验测定软骨细胞存活数。 5．细胞计数绘制生长曲线观察在IGF一1作用下软骨细胞的增殖情 况。 6．采用t检验，进行统计学分析。 ·】· 实验结果 1．倒置显微镜观察： 软骨细胞接种6小时后开始贴壁，培养72小时后大部分细胞贴壁，形 态由球形逐渐向外伸展突起而转变为多边形。随着细胞数量增加，体积增 大，细胞形态接近于一致。加入IGF—l因子的实验组软骨细胞以多边形为 主，分裂相多见，接种14一16天后逐渐融合成单层，呈“铺路石”样外观。 对照组细胞则生长较为缓慢，梭形细胞比例逐渐增高，分裂相少见。 2．细胞爬片HE染色光镜观察： 通过组织学染色，可以更清楚观察软骨细胞形态：软骨细胞多数为小细 胞，形态有多边形，圆形及梭形，可见到核分裂。 3．MTr比色实验： 成正比，即作为细胞相对数，绘出加IGF一1的试验组与对照组及空白组不 同0D值的图表，其结果经过统计学处理分析，表明加入IGF一1实验组的 细胞数明显高于对照组及空白组，所以我们认为，IGF一1对软骨细胞的增 殖具有促进作用。 4．细胞计数绘制生长嚏线： 细胞接种后出现潜伏期，实验组自第4天起细胞增殖能力增强，对数期 细胞数倍增时间为120小时。对照组自第4天起细胞缓慢增殖，没有明显 的对数增殖期。第16天时实验组为对照组的3倍以上，明显高于对照组。 与MTr试验结果一致，说明IGF一1对成兔关节软骨细胞的促进作用。 讨 论 采用组织工程学方法体外扩增获得大量的自体细胞进行修复关节软骨 缺损的研究已