结核分枝杆菌CFP10和ESAT6优势肽段融合蛋白的表达及其免疫学研究.pdfVIP

2010年3月第7卷第7期 ·论 著 · 结核分枝杆菌CFP10和 ESAT6优势肽段 融合蛋白的表达及其免疫学研究 张晓娟 ，刘爱忠 ，于 庭 ，张岩峰 。，包 洪 (1．沈 阳市胸科医院，辽宁沈阳 110044；2．吉林大学第二医院，吉林长春 130041；3．北华大学，吉林吉林 132013) 摘【要】目的：构建结核分枝杆菌分泌蛋白的重组质粒及工程菌 ，获得纯化的CFP10一ESAT6P蛋白抗原，制备初步用 于检测结核病患者 的特异性抗体。方法：根据编码结核分枝杆菌基 因序列设计弓I物 ，克隆表达结核 CFP10一ESAT6 重组蛋白，表达产物免疫新西兰大白兔，其中80％可产生高价的抗体 。利用产物建立IgG间接ELISA方法鉴定其抗原 性及实用性 。结果 ：应用 ELISA法 ，通过检测 113例结核病患者、82例非结核病患者及健康献血员，CFP10一ESAT6P 和对照 PPD对结核病患者血清检测 的敏感性分别为 89．4％和 79．6％，特异性分别为 96．3％和93．9％。结论 ：高 效表达纯化 的CFP10一ESAT6蛋 白抗原性强，可用于结核病患者抗体的检测 ，用于结核病的辅助诊断。 关『键词1结核分枝杆菌；CFPIO；ESAT6；重组表达；抗体 【中图分类号】R一33 文【献标识码】A 文【章编号】1673—7210(2010)03(a)一013—04 ExpressionofCFPIOandmulti-epitopepeptideofESAT6fusionproteinfrom Mycobacterium tuberculosisanditsimmunologicalanalysis ZHANGXi610ju ，LIUAizhong2,YUTin ，ZHANGYanfeng3,BA0Hon (1．ShenyangChestBranchHospital，Shenyang 110044，China；2．TheSecondHospital ofJilinUniversity，Changchun 130041，China；3．NorthChinaUniversity，Jilin 132013，China) [Abstract]Objective：ToconstructtherecombinantplasmidandengineeringbacteriaforexpressionofMycobacteriumtU· berculosissecretionproteinCFP10-ESAT6Pandproduceantibodyofrtestinghumantuberculosisantisera．Methods：DNA encodingprotein CFP10andESAT6-peptidewereamplifiedfrom Mycobacterium tuberculosisH37Rvchromosomalby PCRusingprimerswhichweredesignedinaccordancewiththereportedgenesequence．Thepurifiedproteinwasinjected intoNewZealandrabbitsand80％ showedhighvalence．ThenantibodywasnaalyzedbyELISA dependedonIgGfortest— ingtheantigenicityandpracticality．Results：Bytesting113casesofTBpatients，82casesofnoneTBpatientsnadhealthy candidatesbyusingELISA，thesensitivitynadspecificityofCFP10-ESAT6PnadcontrolPPD totheantiserawerecon- pared，thesensitivitywas89．4％ and79．6％ respectively，andthespecificitywas96．3％ and93．9％ res