大蒜原生质体游离和纯化的研究.pdfVIP

中国在亏c墨提 2010，26(4)：195—199 ChineseAgriculturalScienceBulletin 大蒜原生质体游离和纯化的研究 杨 茹，刘世琦，张自坤，刘中良，张立伟，马 琳 (山东农业大学园艺科学与工程学院，作物生物学国家重点实验室， 农业部园艺作物生物学重点开放实验室，山东泰安 271018) 摘 要：以大蒜胚性悬浮细胞系为研究试材，对原生质体分离纯化技术进行了研究。结果表明：2．0％纤维 素酶OnozukaR一10+0．2％果胶酶Pectolgase+0．55mol／L甘露醇+5mlnoI／LCaC12+5mmol／LMES的酶液， 酶解5h，大蒜原生质体分离效果最好。纯化时，适 当提高离心力的短时间离心有利于原生质体纯化过 程中产量和活力的保持，以1000r／min离心5min，效果为好。 关键词 ：大蒜 ；原生质体 ；游离；纯化 中图分类号：$633．4 文献标志码 ：A 论文编号：2009—1915 StudiesontheProtoplastIsolationandPurificationofAllium satiyIl珊 L． YangRu，LiuShiqi，ZhangZikun，LiuZhongliang，ZhangLiwei，MaLin (CollegeofHorticultureScienceandEngineering,StateKeyLaboratoryofCropBiology, AgricultureMinistryKeylaboratoryofHorticulturalCropBiology,ShandongAgriculturalUniversity，Tai’allShandong271018) Abstract：Theconditionsofisolationandpurificationofprotoplastfrom somaticembryogeniccellsuspension ofAllium satiVLln3L．werestudied．Theresultsshowedthattheoptimalenzymesolutionforprotoplastisolation was2．0％ CellulaseOnozukaR-10+0．2％ Pectolgase十O．55mol／Lmannitol十5mmol／L MES．Theenzyme mixturewasshaken(90dmin)ofr5hat(25+2)℃．Highyieldandviabilityprotoplastswereobtainedwhen purifiedbycentrifugationat1000r／minfor5min． Keywords：garlic；protoplast；isolation；purification 0引言 作者在大蒜胚性细胞悬浮系的基础上，从诸多因 大蒜(AllimnsadvumL．)起源于中亚地区，种质资 素探讨其对分离大蒜原生质体的产量和活力的影响， 源丰富、优 良品种众多。由于采用无性繁殖，不能进行 为今后的原生质体融合及遗传转化等研究打下基础 。 杂交育种，其遗传学和生物学多样性未得到充分利用， 1材料与方法 有一些优 良的品种因种性退化而濒临灭绝。因此，原 1．1试验材料 生质体培养及融合技术将是一条改 良大蒜 品种、创造 供试大蒜(AlliumsativumL．)为苍山蒜，由山东农 新品种的有效途径 ]。 业大学蔬菜试验站提供 。 自Cockingt首次采用纤维素酶从番茄根分离获 1．2试验方法 得原生质体以来，原生质体培养、融合和转化 已经成为