暗纹东方纯线粒体ATPase8和ATPase6基因的克隆与序列分析.pdfVIP

第27卷第 1期 苏 州 科 技 学 院 学 报 (自然 科 学 版) V01．27 No．1 2010年 3月 Joumal0fSuzhouUniversityofScienceandTechno1ogY (NaturalScienee) Mar．2010 暗纹东方纯线粒体ATPase8和ATPase6 基因的克隆与序列分析 邵爱华 ．一，杜 建 ，陈 葵 ，朱 江 (1．苏州科技学院化学与生物工程学院，江苏 苏州 215009；2．苏州大学 医学部，江苏 苏州 215123) 摘 要：克隆并测定了暗纹东方鲍(Takifugufasciatus)线粒体ATP合酶F0亚基8(ATPase8)和亚基6(ATPase6)的序 列，并对其进行了初步分析 。结果表 明：PCR扩增产物的总长度为 923bp，其 中842bp为 ATP8和ATP6基 因的编码 区。ATP8基 因长 168bp，编码 55个氨基酸残基的蛋白质 ，其蛋 白分子质量为 6．8KD，等 电点为 7．85；ATP6基 因长 684bp，编码227个氨基酸残基的蛋 白质 ，其蛋白分子质量为 24．9KD，等 电点为 9．16。暗纹东方纯ArP合酶 F0亚基 8和亚基 6与其他 已报道的部分东方纯属鱼类具有很高的同源性 。通过探讨 ATP合酶 F0亚基所含的信息量 ，发现 相对于其他线粒体基因，A11Pase8和ATPase6基因所含鉴别信息较少。 关键词 ：暗纹东方纯 ；线粒体 DNA；AI’1)合酶 ；亚基 中图分类号：Q959．468 文献标识码：A 文章编号：1672_o687(2010)01_oo41_o6 自PCR技术和直接测序方法的广泛应用后 ，线粒体 DNA成为了系统发育研究的可靠标记。20世纪80 年代以来，线粒体 DNA(mtDNA)分析已广泛应用于鱼类分子遗传学、系统发育进化及物种鉴定的研究中。国 外已有大量的运用 mtDNA进行鱼类种群遗传结构及品系鉴定的研究报道 ，国内研究者对鱼类 mtDNA物理 图谱 、基因定位 、片段克隆和结构分析也有一些研究，其 中以鲤科 、鲇科为多 -【-4]。 线粒体中的氧化磷酸化作用是在 5种复合物(复合物 I，复合物 II，复合物 III，复合物Ⅳ和复合物V)催 化下实现的。复合物V即为ATP合酶，ATP合酶由F1和 Fo两部分组成，其中F1由核基因编码 ，为该酶的 活性 中心；Fo由两个亚基组成 ，受线粒体基因编码 ，即ATP8基 因编码亚基 8(ATPase8，ATP8)和ATP6基因 编码亚基 6(ATPase6，ATP6)。对 l3个线粒体基因所编码蛋 白的研究表明，ATP8的序列保守 ，而ATP6在线 粒体基因组编码的蛋白中具有最高的变异性i51。 暗纹东方纯(Takfiugufasciatus)属硬骨鱼亚纲纯形 目纯科东方纯属 (Takf／ugu)，系北太平洋西部地区性 分布的鱼类。东方纯属约 22种，多为中国特有的地方性种类，分布范围较窄，分化较大6[3。迄今，东方纯属的 分类主要依据形态解剖学特征和细胞遗传学与生化遗传学研究成果，分子遗传学研究分类的成果不多7[一¨】。 1995年，东方纯属的红鳍东方纯(Takf／ugurub却es)正式被英 国医学研究委员会接纳为新的模式动物 【。 本实验以暗纹东方纯为对象，首次克隆得到了ATP8和 ATP6的基因序列并分析了其序列特征 ，同时结 合研究结果探讨 了暗纹东方纯与 GenBank中多个 目特别是 同属鱼类间系统发生与演化的关系 ，为从分子水 平上探究暗纹东方纯线粒体基因组的遗传特点，进一步探究物种进化关系和物种多样性等提供基础资料。 1 材料与方法 1．1 实验材料 实验暗纹东方纯 (养殖体)购 自苏州南 门水产品市场。限制性 内切酶、PremixExr~q酶、DNAFragment 收【稿 日期]2009-09-08 基【金项 目】农业部行业标准资助项 目(2002—04084)；苏州科技学院科研基金资助项 目(2005-Z862) 作【者简介]邵爱华(1968一)，女 ，江苏南通人，副教授，博士研究生，研究方向：水生动物分子生物学。 通讯联系人：朱 江 (E-mail：sdzjyz@hotma