适用于生菜叶片蛋白质双向电泳方法的建立及初步应用-基因中心.pdfVIP

植物遗传资源学报 2009 , 10 ( 1) : 106110 Journal of P lan t Genetic R e source s 适用于生菜叶片蛋白质双向电泳 方法的建立及初步应用 1, 2 1, 2 2 1, 2 刘丽娟 ,舒烈波 ,陈海荣 ,罗利军 ( 1 华中农业大学 ,湖北武汉 　430070; 2 上海市农业生物基因中心 ,上海 　20 1106) ( ) 　　摘要 : 以生菜 L actuca sa tiva 叶片为研究材料 ,参考拟南芥和水稻的双向电泳方法 ,分析了等点聚焦时间和染色方法等 影响双向电泳的关键因素 ,建立适合生菜叶片总蛋 白质分离的双向电泳方法 :采用三氯乙酸 丙酮沉淀法进行总蛋 白质提 取 ,用 24 cm 固相 pH 梯度等电聚焦 8000V ×8h 结合 12 % 的 SD SPA GE进行双向电泳分离 ,银染法和考马斯亮蓝染色法染 色都获得了较好的结果 。应用 Im ageM a sterE lite软件对考马斯亮蓝染色法染色的图谱进行分析表明 :每张凝胶上都检测 到超过 1000 个的蛋白质 ,不同凝胶之间蛋白质的匹配律达到 98% ,具有较高的分辨率和重复性 。初步分析了生菜叶片蛋 白质的等电点 、分子量的分布情况 ,发现生菜叶片蛋 白质的等 电点以 5. 0 ～5. 5 之间最多而分子量主要集中在 20 ～60kD 之间 。 关键词 :生菜 ;叶片 ;蛋白质 ;双向电泳 Twod im en siona l Electrophoresis for L eaf Prote in of L ettuce ( L actu ca sa tiva) and Its Pr imary Applica tion 1, 2 1, 2 2 1, 2 L IU L ijuan , SHU L iebo , CH EN H airong , LUO L ijun (1 H uazhong A g ricu ltu ra l Un ivers ity, W uhan, H ubei 4300 70; 2 S hang ha i A g robiolog ica l Gene Cen ter, S hang ha i 201106) 　　A b stract:R eferring to the twodim en sional electrop hore sis (2 D E) p rotoco l develop ed for rice and A rabidop s is ( ) tha liana , factors influencing 2 D E m ap for L ettuce L actuca sa tiva were inve stigated and a 2 D E p rotoco l su itab le for lettuce leaf wa s develop ed a s a re su lt. Total p rotein s of samp le s were extracted u sing TCA acetone m ethod and sep arated by 2 D E u sing 24 cm immob ilized pH gradien ts isoelectric focu sing