不同浓度半胱氨酸对延边黄牛卵母细胞体外成熟和体外受精影响.pdfVIP

HeilongjiangAnimalScience 32 andVeterinaryMedicine No1l 2009 同浓麈半胱氯酸对延迦黄牛鲫母细胞 俸 成熟和俸外受精 影响 刘 骞 ，鲁京兰 ，崔成都 ，吴树红 (1．延边大学农学院，吉林 龙井 133400，2．梨树县园艺特产局，吉林 梨树 136500) 中图分类号：$813 文献标识码 ：B 文章编号：1004—7034(2009)11—0032—02 近年来，随着卵母细胞体外成熟 (wM)、体外受 1．2．3 卵母细胞的体外受精 用肝素处理精子使其 精 (IVF)以及细胞核移植技术的不断发展，牛胚胎的 获能，后将体外成熟培养24h的COCs与获能精子共 体外生产已经在几个不同的培养体系中获得了成功。 培养，培养条件为39oC、5％、CO：、饱和湿度，培养时 但是，卵母细胞生长发育是一个非常复杂的过程，受 间为24h。 多种因素的影响，有些因素的作用对于同种类动物的 1．2．4 受精卵的体外培养 将体外受精后的卵母细 卵母细胞或体外／体内培养条件下的卵母细胞有着较 胞从受精液 中取出，用移液器反复吹打，使卵母细胞 大的差别。要找出各种动物卵母细胞体外培养的最 周围颗粒细胞脱落，然后用体外培养液冲洗3次，移 佳方案以提高卵母细胞体外成熟率，尚有许多工作需 人体外培养液微滴中培养，培养条件同体外成熟过 要做。研究以延边黄牛卵母细胞为试验材料，试图探 程 。 明不同浓度的半胱氨酸对延边黄牛卵母细胞体外成 1．3 试验设计 熟和体外受精的影响，现报道如下。 试验一，将未成熟卵母细胞随机分为4组，分别 1 材料与方法 在基础培养液 中添加 0(对照组)，0．05，0．095， 1．1 材料 0．18mg／mLcysteine成熟培养24h，每组重复5次。 1．1．1 主要试剂 L一半胱氨酸(Sigma公司产品)、 试验二，将对照组和处理组分别进行体外受精后 TCM一199(Sigma公司产品)、D—PBS(Sigma公司产 体外培养，每组重复5次。 品)、FSH、E (宁波激素厂生产)。 1．4 数据统计与处理 1．1．2 卵巢的来源及保存 取屠宰厂废弃的延边黄 试验数据用 SPsS13．0软件分析，差异显著标准 牛卵巢，保存在37℃的无菌生理盐水中，2h内运回 为 P0．05。 实验室。 2 结果 1．2 方法 2．1 不同浓度半胱氨酸对卵母细胞体外成熟率的影 1．2．1 卵母细胞的体外成熟培养 用注射器从直径 响(见表 1) 为2—8mm的卵泡 中吸取卵丘 一卵母细胞复合体 (COCs)，采集的COCs用等渗液冲洗 3次，再用体外 表 l 半胱氨酸对延边黄牛卵母细胞体外 成熟率的影响 成熟培养液冲洗 3次，之后移入准备好的培养微滴 (80～100 L)中进行体外成熟培养，每个培养微滴 中放入30个卵母细胞。培养条件为39oC、5％CO 、 饱和湿度，培养时间为24h。 1．2．2 卵母细胞成熟的判定 随机抽取体外成熟培 养24h的卵母细胞，用移液器反复吹打，使卵母细胞 周围的颗粒细胞脱落，在实体显微镜下观察裸露的卵 注：同列数据肩标字母不同表示差异显著 (PO．05)。 子，以是否存在第一极体来判定卵母细胞