第九章 现代生物技术概述.pptVIP

果蝇 果蝇在25℃时，从卵到成蝇需10天左右。 成虫可活20～33天。 1.卵 2.一龄幼虫 3. 二龄幼虫 4.三龄幼虫 5.蛹 6.成虫 果蝇生长周期 1 摩尔根利用果蝇证实了孟德尔定律，而且发现了果蝇白眼突变的性连锁遗传，提出了基因在染色体上直线排列以及连锁交换定律1933年因此被授予诺贝尔奖。 2 1946年，摩尔根的学生，被誉为“果蝇的突变大师”的米勒，证明Ｘ射线能使果蝇的突变率提高150倍，因而成为诺贝尔奖获得者。 3 1995年，诺贝尔奖再次授予三位在果蝇研究中刘易斯、尼尔森沃哈德和维斯郝斯。他们发现了早期胚胎发育的遗传控制。 小果蝇成就大梦想 斑马鱼 斑马鱼的发育过程 斑马鱼的遗传操作 斑马鱼的轴突束和神经纤维网 小鼠 小鼠生长周期 1902年哈佛大学的Castle在孟德尔遗传学研究的影响下开始小鼠的遗传学研究； 1982年首次报道了携带有外源基因的转基因鼠； 1998年在克隆羊Dolly羊出生后1年，克隆小鼠在夏威夷诞生； 2002年小鼠基因组全序列测序完成，从2005年开始，大规模的基因删除研究开始在美国、欧盟和加拿大实施。　　 The Jackson Laboratory is based in Bar Harbor, Maine The Jackson Laboratory建立于1929年，是一个从事基于小鼠的生物医学研究的非赢利性独立研究机构。 The Jackson Laboratory作为全球小鼠模型资源中心，拥有全世界品系最丰富的小鼠资源库。至2009年，拥有4000多个品系的实验小鼠JAX?Mice。 The Jackson Laboratory 小老鼠促成大科学 小鼠是哺乳动物，与人的亲缘关系比较近，其解剖学结构、发育过程、生化代谢途径都与人接近，为人类疾病的克隆提供了极佳的实验材料。作为经典的医学实验动物，小鼠已经对医学诸多领域的研究作出了卓越贡献。 目前，全世界每天约有2500万只小鼠被用于生物医学研究，以小鼠为对象的研究已经获得了17项诺贝尔奖。 * 注意比较DNA聚合酶 * * * * * * * * * 连接的部位： 是磷酸二酯键（梯子的扶手）， 不是氢键（梯子的踏板） DNA连接酶(DNA ligase)—“分子缝合针” 主要用于DNA片段之间的连接，将一个DNA片段的5’端的磷酸与另一个DNA片段的3 ’端的羟基连接成磷酸二酯键，从而把两段相邻的DNA链连接成一条完整的链。 T4 DNA 连接酶, ATP TGCTTAA 5’ - 3’ - ACG -OH 3’ -P 5’ AATTCGT GCA - 3’ - 5’ 5’ P - 3’ OH - TGCTTAA 5’ - 3’ - ACG AATTCGT GCA - 3’ - 5’ T4（噬菌体） DNA 连接酶 (T4 DNA ligase) 催化 DNA 的 3’-OH 和 5’-P 之间形成磷酸二酯键 连接带粘性末端的两个 DNA 分子 T4 DNA连接酶, ATP ACG 5’ - 3’ - TGC -OH 3’ -P 5’ TAGCCGT ATCGGCA - 3’ - 5’ 5’ P - 3’ OH - 5’ - 3’ - TGCTAGCCGT ACGATCGGCA - 3’ - 5’ 连接带平末端的两个 DNA 分子 T4 DNA 连接酶 ▲外源基因(如人胰岛素基因)怎样才能导入受体细胞(如大肠杆菌)？ 导入过程需要运输工具——载体。 ●假如目的基因导入受体细胞后不能复制将怎样？ ●作为载体没有切割位点将怎样？ ●目的基因是否进入受体细胞，你如何察觉？ ▲作为载体必须具备的条件： 1）能够在宿主细胞中复制并稳定地保存。 2）具多个限制酶切点，以便与外源基因连接。 3）具有某些标记基因，便于进行筛选。 如抗生素抗性基因等 (二) 载体(vector) 抗生素的作用位点 抗生素抗性基因的产物及其功能 ▲质粒是什么？为什么它能作为转基因的载体？ 细胞染色体外能自主复制的小型双链环状DNA分子。质粒的存在对宿主细胞无影响，它常含有抗生素抗性基因。 复制元件 多克隆位点 多克隆位点(multiple cloning site;polycloning site;MCS)：DNA载体序列上人工合成的一段序列，含有多个限制内切酶识别位点，能为外源DNA提供多种可插入的位置或插入方案。 ? 克隆载体 (Cloning vector) 用于构建基因组文库、cDNA文库以及克隆某一特定基因 或 cDNA 以测定其核苷酸序列。 ? 表达载体 (Expression vector) 用于表达某一基因或 cDNA以获得目的蛋白质。