HBV反转录酶区rtA181S变异与阿德福韦酯耐药相关性研究.pdfVIP

传染病信息 2013 年 12 月 30 日 第26 卷 第 6 期 Infect Dis Info, Vol. 26, No. 6, December 30, 2013 339 · · HBV 反转录酶区 rtA181S 变异与阿德福韦酯耐药相关性研究 杨 菁，刘 妍，陈容娟，许智慧， 陈 丽，辛绍杰，刘新光，徐东平 [摘要] 目的 分析 反转录酶（ ）区 变异与阿德福韦酯（ ）耐药的相关性。 方法 应用直接测序法筛 HBV RT rtA181S ADV 选分析大样本慢性 HBV 感染者 rtA181S 变异的检出频率，并对 1 例接受 ADV 单药治疗失败的慢性乙型肝炎患者血清中 区基因进行克隆测序，分析相关变异形式 。 用 和 双酶切 及 载体后再连 HBV RT Xho Ⅰ Sph Ⅰ pGEM-Teasy RT pTriEx-HBV(C) 接，构建 倍 野生株和耐药株的重组质粒 ，转染人肝癌细胞系 细胞， 后分别加入不同浓度的 （、 、 1.1 HBV HepG2 5 h ADV 0 0.033 、 、 、 ）。 隔天换药， 后收集细胞上清，采用实时荧光定量 法检测不同药物浓度作用下细胞 0.100 0.330 1.000 3.300 μmol/L 4 d PCR 培养上清中的 HBV DNA 载量，并分析其表型耐药特点。 结果 9830 例慢性 HBV 感染者的 12 000 个血清样本中，有 46 例样 本检出 rtA181S 变异（单独或与其他耐药变异联合出现），在 653 例中检出经典的 rtN236T/A181V 变异。 其中随访的 1 例在接 受 ADV 治疗 19 个月后出现了病毒学和生化学突破，直接测序检出 rtA181S+N236T 变异，克隆测序分析显示在 24 个克隆中 个（ ）为野生型， 个（ ）为 变异型， 个（ ）为 变异型， 个（ ）为 变异型， 11 45.83% 6 25.00% rtN236T 5 20.83% rtA181S 1 4.16% rtA181V 1 个（ ）为 变异型。 在体外实验中， 、 和 变异株的相对复制力分别是野