结核分枝杆菌异烟肼耐药株和敏感株亚细胞蛋白质组差异研究.pdfVIP

结核分枝杆菌异烟肼耐药株和敏感株 亚细胞蛋白质组差异研究 陆晔 林成招 胡衡 梅建 武洁 沈鑫 目的研究结核分枝杆菌异烟肼耐药株和敏感株亚细胞蛋 白质组差异 ，鉴定菌体细 胞壁蛋白和细胞膜蛋白中与异烟肼耐药相关的蛋白，并初步探讨其在临床检验中的应用价值。方法 应用密度梯度离心法分离5株异烟肼耐药株和5株敏感株的细胞壁和细胞膜蛋白，利用二维液相色 谱分离技术进一步获得耐药株和敏感株的亚细胞蛋白表达差异图谱。运用基质辅助激光解析/电离 飞行时间质谱技术对获得的1280个细胞壁和细胞膜组分进行质谱鉴定，并运用DAVID数据库中GO 注释功能对鉴定到的蛋白进行细胞成分和生物过程的注释和分类。运用NASF技术对蛋白表达进行 定量，报告阈值为1.5。选取5个在耐药株中表达上调、2个在敏感株中表达上调的蛋白分别与菌株 来源患者的血清进行ELISA检测，检测上述组分与血清样品发生免疫应答的强度，组间比较采用t检 验。结果共鉴定到347个蛋白。蛋白定位分析表明58％蛋白定位于细胞膜或跨膜。蛋白功能聚 类分析表明31％蛋白参与三羧酸循环，26％、15％蛋白分别参与脂类、脂肪酸生物合成和代谢，28％ 蛋白参与脂质体的生物合成、代谢、转运和定位。其中琥珀酰氯化胆碱合酶、单加氧酶、假想蛋白 Rv2255c、烟碱核苷二甲基联苯酰磷酸核酮糖激酶、膜磷脂胞嘧啶转移酶在耐药株中表达上调，含有上 述蛋白的组分与感染耐药株患者的血清免疫学反应的吸光度 （A450值）明显高于与感染敏感株患者的 血清免疫学反应强度，差异有统计学意义(t值分别为0.028、0.044、0.066、0.064、0.083，P均＜ 0.01)。Rv2002蛋白A链、Rv2632c蛋白A链在敏感株中表达上调，含有上述蛋白的组分与感染敏感 株患者的血清免疫学反应的A450值明显高于与感染耐药株患者的血清免疫学反应强度，差异有统计 学意义 （t值分别为0.053、0.073，P均＜0.05）。结论运用密度梯度离心法和二维液相色谱-质谱技 术能在亚细胞水平上富集并鉴定结核分枝杆菌异烟肼耐药株和敏感株中表达有差异的蛋白。有助于 寻找异烟肼耐药株感染相关的抗原蛋白，为进一步探讨结核分枝杆菌耐异烟肼机制、研究耐药株-宿 主相互作用提供了有价值的线索。 结核分枝杆菌；异烟肼耐药；二维液相色谱-质谱技术；亚细胞蛋白质组 Comparisonofthesub-cellularproteomeofMycobacteriumtuberculosisisoniazidsusceptiblestrain withresistantstrain LUYe* LIN Cheng-zhao# HUHengMEIJian WUJie SHEN Xin *DepartmentofMolecularBiologyforPublicHealth,ShanghaiMunicipalCenterforDiseaseControlandPre vention,Shanghai200336,China;#LabofSystemBiology,InstituteofBiomedicalSciences,FudanUniversi ty,Shanghai200032,China Objective Tocomparethesub-cellularproteomeofisoniazid(INH)-resistantMyco bacteriumtuberculosis(MTB)withthatofsensitivestrainsforidentifyingofuniqueproteinsofthesestrains anddiscussingtheirpreliminaryapplicationinclinicaldiagnosis.MethodsProteinsofcellwallandmem braneof5INH-resistantstrainsand5INH-sensitivestrainswereextractedbydensitygradientcentrifugation. Theextractsweresubsequentlyanalyzedusingweakcationexchange(WCX)liquidchromatography(LC) followedreversephase(RP)liquidchromatographytocomparethesub-cellularproteinpatterns.Atotalof 1280fractionswerecollectedandidentifiedb