胶原酶分离及低速离心结合筛网过滤法纯化子宫内膜细胞的研究.pdfVIP

第34卷第 1期Vo1．34，No．1 生 殖 与 避 孕 doi：10．76690．issn．0253-357X．2014．01．0012 2014年 1月Jan．2014 Reproduction＆Contraception Em‘ail：randcjournai@163．tom 胶原酶分离及低速离心结合筛网过滤法 纯化子宫内膜细胞的研究 张婷婷 ，2 张瑞晓1 林明媚 罗 璐1 吴惠茜1 王 琼1 周灿权1 (1_中山大学附属第一医院，广州，510080) (2．广东省中山市人民医院妇产科，中山，528400) 【摘要】目的：探索分离子宫内膜细胞以及纯化子宫内膜腺上皮细胞与间质细胞的最佳方法。 方法：采用I型胶原酶、胰酶、I型胶原酶混合胰酶以及机械研磨等4种方法处理大鼠子宫，比 较细胞数和活细胞率，从而获得分离子宫内膜组织的最佳方法。用获得的最佳方法分离人类子 宫内膜组织，比较采用2次筛网过滤(筛网法)和低速离心结合筛网过滤(结合法)进一步纯化子宫 内膜腺上皮细胞和间质细胞获得的细胞数和纯化效率，从而获得较好的纯化方法。结果：I型 胶原酶、胰酶、I型胶原酶混合胰酶和机械研磨处理大鼠子宫组织所得的细胞数分别为6．43± 3．55×105／ml、4．59±2．35×105／ml、4．25±1．06×105／ml、3．57±1．15×105／ml，差异有统计 学意义(P0．05)；活细胞率分别为98．90±0．74％、96．63±1．84％、97．97±2．O2％、97．20± 4．41％，差异无统计学意义(P0．05)。筛网法和结合法纯化分离所获得的腺上皮细胞数为O．43± 0．21×105／ml、8．27±2．46×105／ml；间质细胞纯度为92．94±2．89％和 99．19±0．24％，差异 均有统计学意义(P0．05)。结论：I型胶原酶是分离子宫内膜细胞的最佳方法，而采用低速离心 结合筛网过滤法是较理想的纯化分离后的子宫内膜细胞的方法。 关键词：腺上皮细胞；间质细胞；I型胶原酶；低速离心；筛网过滤 中图分类号：R711．71 文献标识码：A 文章编号：0253—357X(2014)01．0012—05 子宫内膜是覆盖在子宫肌层之上的多层组织， 度的子宫内膜腺上皮和间质细胞，9O年代后期至今 主要由腺上皮细胞和间质细胞构成。子宫内膜的腺 不断有各种分离和纯化方法的研究报道。 上皮细胞和间质细胞的功能存在很大差异，分离以及 子宫内膜腺上皮细胞和间质细胞分离方法有胶 纯化子宫内膜腺上皮细胞和间质细胞是子宫内膜功 原酶、胰酶、胶原酶混合胰酶和机械研磨等，由 能研究中的2个关键步骤。获得高产量、高活细 于人类的子宫内膜组织来源困难，活检的样本量很 胞率、高纯度的细胞是后续实验成功的重要基础， 少，酶消化后细胞活性和表面结构损伤较大，获得的 因此，为了追求更高产量、更高活细胞率和更高纯 存活细胞数不多，所以一直未见有同时比较4种方 法获得存活细胞数的研究报道。分离后的细胞既 往多采用2次筛网法进行腺上皮细胞和间质细胞的 本研究为国家 自然科技基金资助项 目，项目编号 纯化 ”【，但细胞纯度不高。为了更进一步提高人类 通讯作者：王琼：Tel：+86．208362； E—mail：wnagqionggz@holmail．corn 子宫内膜腺上皮细胞和间质细胞的分离和纯化效率， ：共同第一作者 我们设计了本实验。 - 12- 1 材料与方法 网反置在另一培养皿上，生理盐水反复冲