新生小鼠心肌干细胞与心肌细胞共培养诱导分化试验.pdfVIP

血栓与止血学2010年第 16卷第 1期 · 5 · · 论 著 · 新生小 鼠心肌干细胞与心肌细胞共培养诱导分化试验△ 欧念文，陆东风 。杨镇军 ，胡德喜 (广州医学院第一附属医院心内科。广州，510120) 摘 要： 目的 了解心肌条件培养液有无诱导心肌干细胞 (cardiacstemcells，CSCs)分化为心肌细胞的作用 ，CSCs 与心肌细胞接触能否影响CSCs向心肌分化。方法 用免疫磁珠分选原代 CSCs，得到纯化的c—KitCSC。分 3组培养 ： 条件液组用心肌条件培养液诱导CSCs21d，混合组分别用PKH26或 DAPI标记 CSCs后与心肌细胞混合培养8d，空白 组无干预培养21d，观察CSCs形态变化。各组完成培养后，用免疫组化法鉴定肌钙蛋 白Troponin-T和缝 隙连接蛋 白 connexin43表达。结果 心肌条件培养液不能有效诱导CSCs表达心肌细胞特异蛋白Troponin—T和connexin43，未见 自 发搏动细胞。CSCs与心肌细胞接触后 ，两者同步搏动。CSCs可表达Troponin—T和connexin43。结论 心肌条件培养液 无诱导 CSCs向心肌细胞分化的作用，心肌细胞与 CSCs接触能有效诱导CSCs向心肌细胞分化。 关键词 ： 心肌干细胞； 共培养 ； 诱导 [中图分类号]Q343．6 [文献标志码]A [文章编号]1009—6213(2010)01—05—05 StudyonDifferentiation0fM urineCardiacStem CellsCo．cultruedwithCardiomyocytes ouNian—wen，LUDong—feng，YANGZhen—jun，HU De—xi (DepartmentofCardiology，theFirstAffiliatedHospitalofGuangzhouMedicalCollege，Guagnzhou，510120，China) Abstract：0bjective ToinvestigatewhetherCSCscanbeinducedintocardiomyocytes(CM)bymyo— cardialconditionedmedium．whethercontactwithCM iSnecessarytoCSCsinyocardialdifferentiation．M eth． ods PrimarypassageofCSCsweresortedwithimmunobeadstoobtainC-Kit CSCs．Theregroupswereestab- lished．Thefirstgroup．Withmyocardialconditionedmedium．CSCswereinducedfor21days．The second group，CSCslabeledwithPKH 26 orDAP1wereCO-culturedwithCM for8days．andblankgroupwithnoin· terferencefor21days．Observingmorphologic changeseveryday．Performing immunohistochemistry to detect Troponin—Tandconnexin43expressionatthefina1day．Results Myocardialconditionedmedium hadno effectoninducingCSCsexpressionofTroponin—T and connexin43，nospontaneousbeatingeventswereob— served．WhileCSCsincontac