BD FACSCalibur流式细胞仪.docVIP

BD FACSCalibur流式細胞儀 FACS101 Handbook 本課程介紹「表面抗原流式分析」有關之基礎工作原理。如希望進一步瞭解流式細胞技術應用，請至本公司網站訂閱FACSinformation電子報.tw/bdb/index.html。 如需要本課程手冊，歡迎至本公司網站下載 .tw/bdb/10-5-3-1.html 。 如需要免疫螢光染色方法，請至本公司網站下載 .tw/bdb/10-5-4-1.html 。 一、BD FACSCalibur基本結構 1.1儀器本體： 1. 電源開關：在BD FACSCalibur儀器右側下方，先啟動儀器本體，再打開電腦。 2. 光學系統：BD FACSCalibur 基本配有一支波長488 nm 的氬離子雷射 以BD FACSCalibur 基本型為例 FSC Diode 只收488 nm波長散射光 SSC PMT 只收488 nm波長散射光 FL1 PMT 螢光光譜峰值落在綠色範圍（波長515-545 nm） FL2 PMT 螢光光譜峰值落在橙紅色範圍（波長564-606 nm） FL3 PMT 螢光光譜峰值落在深紅色範圍（波長 650 nm） 3. 儀器面板： 儀器前方面板的右下方有三個流速控制鍵、及三個功能控制鍵。 流速控制： LO： 樣品流速：12 (l /min MED：樣品流速：35 (l /min HI: 樣品流速：60 (l /min 功能控制： RUN：此時上樣管加壓，使細胞懸液從進樣針進入流動室。（正常顯示綠色；黃色時表示儀器不正常，請檢查是否失壓。） STANDBY： 無樣品或暖機時之正常位置，此時鞘液停止流動，雷射功率自動降低。 PRIME：去除流動室中的氣泡，流動室施以反向壓力，將液流從流動室沖入樣品管，持續一定時間後，以鞘液回注滿流動室。PRIME 結束，儀器恢復STANDBY狀態。 4. 儲液箱抽屜： 在主機左下方之儲液箱抽屜。可向前拉開，內含鞘流液筒、廢液筒、鞘液過濾器Sheath Filter，及空氣濾網 Air filter。請注意氣路減壓閥Vent toggle之位置。 鞘液筒：位於抽屜左側，容積4升。裝八分滿鞘液筒，儀器可以運行大約 3小時。筒上裝有液面感應器，鞘液用完時，儀器軟體上會有顯示。鞘液筒蓋上有金屬環扣，保證鞘液筒密閉。 廢液筒：位於抽屜右側，容積4升。筒上裝有液面感應器，廢液盛滿時，儀器軟體上會有顯示。注意廢液可能有潛在的生物傳染性。 鞘液過濾器：0.22(m過濾器，去除鞘液中的雜質，保證進入流動室的鞘液是乾淨的。 氣路減壓閥：沿箭頭方向移動閥門開關，鞘液筒減壓，氣壓恢復正常。在鞘液筒添加鞘液時，需要減壓。 空氣過濾網：用於過濾冷卻雷射的空氣。 5. 上樣品區： 上樣品區是樣本管的上樣位置。它包括三個部分，一個是進樣針 Sample Injection Tube，將樣本輸入流動室，還有就是支撐架 Tube Support Arm、和液滴存留系統 Droplet Containment System。 進樣針：是一根不鏽鋼管，將細胞從樣本針中吸入流動室。進樣管外有一套管，是液滴保留系統的一部分。 支撐架：用於支撐樣本管、並負責啟動液滴存留系統。支撐架有三個位置：位於樣本管之下的中位，樣本管左側或右側。 液滴存留系統：系統由支撐架、真空幫浦和外套管組成。當支撐架位於左側或右側位置時，真空幫浦就會啟動，將液體從外管吸入廢液筒內。上樣時，須注意將支撐架位於中位，以避免過多樣品被抽吸到廢液筒內（當支撐架位於中位，真空幫浦停止工作）。更換樣品時，讓儀器保持RUN的模式，使得進樣針可以反沖；切換到STANDBY模式前，確保液路已沖洗徹底以免碎片沈積到流動室中。 1.2 Macintosh電腦與印表機： 準備您的細胞樣品 理想樣品濃度調至1-10 X 105 cells/ml？一般實驗只需0.5 ml的樣品。 細胞樣品務必放至BD FALCON 352052 試管中，否則無法上機。 上機前務必去除樣品中之細胞團塊，以防止管路堵塞？可使用附濾網BD FALCON試管 (Cat. No.352235) 或35-55 (m的尼龍篩網。 供流式分析的樣品是單細胞懸浮液，而且大部分樣品都需經螢光染色。表面抗原螢光染色的方法大致有兩種：直接免疫螢光、間接免疫螢光染色。研究生可至本公司網站下載染色方法 .tw/bdb/10-5-4-1.html 直接免疫螢光染色 Lysed - No - Wash Proc