稻瘟病菌成熟附着胞cDNA差减文库构建.pdfVIP

稻瘟病菌成熟附着胞cDNA差减文库的构建 摘要 稻瘟病菌[Magnaporthegrisea]附着胞是稻瘟病菌在侵入水稻组织前形成的 一种侵染结构，是稻瘟病菌侵染过程中的一个关键环节。了解稻瘟病菌附着胞阶 段基因表达的状况对于弄清附着胞的形成、发育和侵入机制具有重要意义。本论 文研究了形成24d时的稻瘟病菌附着胞基因表达及与菌丝、孢子基因表达的差 异，为寻找参与稻瘟病菌附着胞形成、发育过程或穿透过程的关键基因打下了基 础。主要研究结果如下： 1、 本论文采用投影胶片诱导稻瘟病菌附着胞形成，发现分生孢子以1× 10÷个『mL按种时，效果最好，附着胞形成率达到96．5％1菌丝及分生 孢子作对照，分别提取附着胞、菌丝和分生孢予总RNA，浓度分别达 到1．42肛州和5．09,g／¨1。 2、 本论文借助SMART技术和长片段PCR-J3E术将稻瘟病菌附着胞与稻瘟 病菌菌丝／孢子的RNA反转录eDNA，分子量范围都在200bp～6Kb之间； 分布在400bp至lJ2kb之间。 3、 本论文利用SSH技术构建稻瘟病菌发育24d时附着胞与稻瘟病菌菌 丝，孢子eDNA的差减文库。重组质粒径测序获得250条EST序列。这 griseaDatabase用blast进行相似性联配，并 余EST序YIJ在Magnaporthe 祝个比较分析EST序列对应的基因组DNA序列，确定这155条EST序列对 应着142个基因。RT—PCR验证结果表明共有71个基因(50％)在稻瘟病 军附着胞中特意表达。再NCBI上的EST序列相似性联配(blast)结果 没有找到同源序列。上述结果表明本eDNA文库在筛选稻瘟病菌附着胞 特异表达基因取得了很好的结果。 关键词：稻瘟病菌，附着胞，eDNA差减文库，SSH Librariesin TheConstructionofcDNASubtraction AssociationWithMature of Magnaporthe Appressorium Abstract isa cellularstructureformed The specialized byMagnaporthe appressorium issue．This isa forme before stagekey grisea penetratingplant appressofiurn period to rice．Itis tofmdoutthe of riceblast infect significant stagegeneexpression fungus UStounderstandthe of formation。 of for process appressorium appressorium inthericeblast this the