斜纹夜蛾核多角体病毒vp39基因克隆与表达.pdfVIP

斜纹夜蛾核多角体病毒vp39基因的克隆与表达 李赛男 摘要 litura 斜纹夜蛾核多角体病毒(Spodopteramulticapsid 计算机软件分析表明，VP39蛋白序列中包含4个可能的N．糖基化位点和2个可 VP39蛋白的同源序 能的II型酪蛋白激酶磷酸化位点。BLAST搜索SpltMNPV 列，在NCBI 白序列。计算机软件分析发现，24种杆状病毒VP39蛋白序列中都台有不同数目 VP39 的可能的N．糖基化位点和II型酪蛋白激酶磷酸化位点，在包括SpltMNPV 蛋自在内的25种杆状病毒VP39蛋白序列中均具有8个保守的半胱氨酸残基 (Cys)。Clustal VP39蛋白与 W软件比较这些序列的同源性发现，SpltMNPV 24种杆状病毒VP39蛋白问的同源性介于13％到51％之间，与其他非杆状病毒 VP39蛋白间的同源性介于7％至1J17％之间。 超量表达出带6xHis接头的融合蛋白，大小与预期分子量一致。将此融合蛋白免 疫新西兰大白兔，制备了VP39蛋白多克隆抗血清。用此抗血清进行定位分析表 明，VP39蛋白存在于包埋型病毒粒子和芽生型病毒粒子的核衣壳中。VP39蛋白 在细胞中的表达时相显示，从病毒感染后24h开始检测到VP39蛋自的表达。转 录时相表明，vp39基因的转录本在病毒感染后6h即可检测到；5-RACE结果表 碱基G。实验结果分析显示，SpRMNPVvp39基因是一个杆状病毒晚期结构基因。 为进一步研究杆状病毒与宿主间的相互作用机制，进行了VP39与 均能与VP39抗体和GST抗体反应，证明该融合蛋白表达正确。 关键词：斜纹夜蛾核多角体病毒，vp39，克隆，表达，定位 and of of limra expressionvp39geneSpodoptera Cloning multicapsidnucleopolyhedrovirus LiSainan Abstract litura Spodopteramulticapsid gene contains909 302aminoacidswith molecolarof33．9 bp，encoding predicted weight revealedthatVP39 contains4 aIlalysjs kDa．Computer protein potential sites 2 caseinkinase11 sites． N—glycosylationrN-X-sff)andpotential phosphorylation BLASTsearchrevealedthat VP39 has41 in SpltMNPVprotein homologousproteins NCBl 24baculovirusesVP39 GenBank，including