DNA的粗提取与鉴定实验.docVIP

? “DNA的粗提取与鉴定实验”分类比较 湖北省恩施清江外国语学校 彭邦凤 一、不同试剂用途及原理比较 试剂 浓度 用??? 途 原理（“△”为实验的主要原理） NaCl 溶液 2mol/L 溶解DNA DNA在氯化钠溶液中的溶解度随溶液浓度的变化而改变，溶解度在2mol/L时最大、0.14mol/L时最小 △ 0.14mol/L 析出DNA 0.015mol/L 鉴定时的溶媒 该浓度下也能溶解DNA ? 酒精 95%（体积分数） 除杂以提纯DNA DNA不溶于酒精，但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精溶液 △ 二苯胺 ? 鉴定剂 DNA遇二苯胺（沸水浴）会染成蓝色 △ 柠檬酸钠 0.1g/mL 抗凝剂 除去血液中的钙离子，防止血液凝固 ? 二、方法步骤比较 项目 方法步骤 添加物质及目的 操作要求及目的 取用与要求 目的 要求 目的 制备鸡血细胞液（教师准备） 取0.1g/mL的柠檬酸钠100mL于500mL烧杯中，加鸡血180 mL 抗凝 缓慢搅拌 混匀血液与柠檬酸钠，防血凝 离心或置于冰箱 使血细胞与血浆分离 1．提取鸡血细胞的细胞核物质 20mL蒸馏水 促进血细胞吸水破裂，释放核物质 搅拌：单向、快速、5min 加速血细胞破裂 过滤：1-2层纱布 滤取含DNA的滤液 2．溶解细胞核内的DNA 2mol/L的 NaCl溶液40mL 溶解DNA 搅拌：单向、缓慢、1min 促进DNA溶解 3．析出含DNA的黏稠物 加蒸馏水至黏稠物不增加为止 降低NaCl溶液浓度，析出DNA 搅拌：单向、轻轻 混匀溶液，促进析出完整DNA分子 4．滤取含DNA的黏稠物 ? ? 3层～4层纱布过滤 获取含DNA的黏稠物 5．将DNA的黏稠物再溶解 2mol/L的 NaCl 溶液20mL 再溶解DNA 单向搅拌 使黏稠物尽可能多地溶解于溶液中 6．过滤含有DNA的氯化钠溶液 ? ? 3层～4层纱布过滤 滤取含DNA的滤液 7．提取含杂质较少的DNA 加入冷却的、体积分数为95%的酒精50mL 让部分杂质溶于酒精，析出含杂质较少的DNA 搅拌：单向 促进杂质溶解、DNA析出 用玻璃棒卷起丝状物，用滤纸吸水 获得DNA（白色乳状丝状物） 8．DNA的鉴定 向2支20 mL试管各加0.015mol/L的NaCl溶液 一支对照，一支溶解DNA（作溶媒） 搅拌 促进DNA溶解 各加4mL二苯胺试剂 作为DNA鉴定剂 沸水浴5 min，冷却观察颜色 DNA所在试管溶液变蓝色 ??? 三、DNA的粗提取和鉴定实验中应注意的问题 1．盛放鸡血细胞液的容器，最好是塑料容器。因为鸡血细胞破碎后释放出的DNA，容易被玻璃容器吸附，细胞内DNA的含量比较少，如果被玻璃窖吸附却一部分，提取的DNA就会更少。因此，实验过程中最好使用塑料的烧杯和试管，这样可以减少提取过程中DNA的损失。 2．获取较纯净的DNA的关键步骤。 ⑴充分搅拌鸡血细胞液。DNA存在于鸡血细胞的细胞核中。将鸡血细胞液与蒸馏水混合后，必须用玻璃棒沿一个方向快速搅拌，使鸡血细胞加速破裂，并释放出DNA。 ⑵沉淀DNA时必须用冷酒精。实验前必须准备好大量的体积分数为95%的酒精，并在冰箱中至少存放24h。 ⑶正确搅拌含有悬浮物的溶液。实验步骤3、5、7都需要用玻璃棒搅拌。在进行步骤3、5时，玻璃棒不要直接接触烧杯底部，而且搅拌要轻缓，以便获得较完整的DNA分子。进行步骤7时，要将玻璃棒插入烧杯中溶液的中间，用手缓慢转动5min～10min。 3．本实验中鉴定DNA的方法为二苯胺法。如果在没有二苯胺的情况下也可以用以下几种方法。 ⑴配制染色剂。用蒸馏水配制0.05%的溴化乙锭（EB）溶液。 ⑵将玻璃棒上缠绕的白色絮状物抹于蜡纸上，再滴1滴EB溶液染色。 ⑶将蜡纸放在紫外灯（260nm）下照射（暗室中），可见橙红色的荧光（DNA的紫外吸收高峰在260nm处）。 4．典例解析 1．下列关于“DNA的粗提取与鉴定”的实验原理中，说法错误的是 A．DNA在氯化钠溶液中的溶解度随溶液浓度的变化而改变 B．利用DNA不溶于酒精的性质，可除去细胞中溶于酒精的物质而得到较纯的DNA C．DNA是大分子有机物，不溶于水而溶于某些有机溶剂 D．DNA溶液中加入二苯胺试剂经沸水浴后会出现蓝色反应 解析：该实验依据的原理是A、B、D，DNA不溶于酒精（属有机溶剂），C说法错误。 答案：C 2．下列关于实验操作的说法中，有误的是（??? ） A．该实验中有两次加入蒸馏水，均是为了析出DNA B．该实验学生操作中多次用到搅拌，除最后一步未强调方向外，其余均要求单向搅拌 C．该实验中有3次过滤，过滤时使用纱布层数与需用滤液或黏稠物有关 D．实验三次加入NaCl溶液，无论浓度是2mol/L，还是0.015mol