2009年8—9月海南罗非鱼暴发性疾病初探.pdfVIP

匠口匦 塑绵塑旦 一 汪开毓 陈德芳 黄凌远 连 海 王 均 李成伟 夕 (四川农业大学动物医学院鱼病研究中心 雅安 625014) 2009年7月下旬起，在海南省多处罗非龟养殖塘陆 进行观察，可见单个散在或呈短链状的近球形细菌 (图 续暴发疾病，各地症状大同小异，据走访了解，该病往 见彩中插2)。 年也有技乍，但2009年尤为突 “I，同药物治疗效果差， 同时，在7己菌条件下，从病鱼的肝脏和大脑分离细 2009年发病率高达409；，发病鱼死TL=率接近100％，养殖 菌，接种脑心浸液琼脂培养基。经过37~C恒温培养24～ 户损炙渗重。本研究r 于8月下旬至9月底分别从海南 48d,时后，在平板上观察到一种单一优势菌落，菌落为 省多处罗1r鱼发病集中 采样，并对所采样品进行了病 白色，表面光泽湿润，边缘整齐。按照病鱼的不同来源 原学研究，对分离株进行药敏分析。现将相关工作结果 对分离到的细菌进行编号，分别为HNOIO1、HN0201、 简介如 卜，以期能给相关疾病的防摔提供参考。 HN0202和 0203，对单个菌落进行革兰氏染色镜检，细 一 菌呈球形，无长链排列。 、 发病情况 2009年7—9』J，在海南省文 吕市暴发了严重的罗非 2．生理生化鉴定和16s rDNA序列测定与系统发 鱼病 。发病 域为池塘养蜻，养巯水面从15~25亩小 分橇 等，水深2～3米， 均放养密度2000尾／市。发病鱼以 各菌株生化鉴定结果一一致，菌株接触酶阴性，IO~C 2oO～3o0克体重为卡。病鱼表现为精神、食欲差，眼球 不生长。采用TIANGENDNA抽提试剂盒提取各分离株总 突出，鳃溢两侧有充 1、出血症状，后期基奉不吃食， DNA，并以TaKaRa试剂盒特异性扩增16SrRNA基因，得 游动迟缓，漂浮 水师，夕E亡前常突然窜游或转 沉入 f~15OObp左右的片段，测序后在美国国家生物技术信息 水 }【lJ死r|。发病时期衷层水温在34℃以上，且罗非鱼发 中心 (NCBI)进行比对，结果4个病例的分离株均与无乳 病率和 I、．率随水温降低而明显缓解。本文分析的4例 链球菌 (octFeptococcusagalact／a 的同源性最高， (IfNO101，HN0201，HNO2O2和HN0203)病鱼来 白海南省 以DNAStar构建系统发育树分离株与无乳链球菌序列相 文吕』的冯坡镇、文教镇等疾病暴发地 。采集的病鱼 似度均高于99．7％。 要么 有媳型的突 症状，要么来 自近期暴发过典型突 3．人工感染试验 眼症疾病的鱼池，每个点采集5尾负，以活鱼或冰冻鲜 待试健康鱼来 自四川某养殖场，无 “突眼症”发病 鱼 运送 实验率分析。 史，体重350克左右，实验前暂养l 。将分离菌株接种 二 、症状 脑心浸液肉汤，用麦 氏比浊管调节细菌浓度至10v个／毫 4例痫鱼集中 现为角膜发 浑浊，眼球边缘有充 升，每株细菌以0．2毫丌／尾攻毒5尾健康罗非鱼，以无 血发 现啄，眼球忡人 ¨．有 同 度的突出(图见彩中 菌肉汤接种作为阴性对照。实验水温为35。C，试验期间 插2)，严 的uJ见眼球脱落；下颁及鳃盖边缘出血，鳍 喂食，隔天换水1／3，攻毒后观察1周。 条基部仃小 n¨J程瞍的充血 (图见彩巾插2)；肝脏肿大充 攻毒后三天 内实验组的龟全部死 ，对照组无异 m，颜色／1均，顷地脆弱