人doppel蛋白及其类似蛋白PrPΔ32-121对SH-SY5Y细胞的细胞毒性作用.pdfVIP

第31卷第 1期 西 安 交 通 大 学 学 报 (医 学 版 ) Vo1．31No．1 2010年 1月 JournalofXi’anJiaotongUniversity(MedicalSciences) Jan．201O ◇论 著◇ 人 doppel蛋 白及其类似蛋 白PrPA32—121 对 SH—SY5Y细胞的细胞毒性作用 徐 琨 ，王 新 ，田 婵 ，石 崧 ，王桂荣 ， 石 琦。，周瑞敏。，姜惠英。，楚雍烈 ，董小平 (1．西安交通大学医学院病原生物学与免疫学系，陕西西安 710061； 2．中国疾病预防控制 中心病毒病预防控制所传染病预防控制国家重点实验室，北京 100052) 摘要 ：目的 体外观察细胞瞬时表达的人 Dpl(doppe1)蛋 白对人神经母细胞瘤 SH—SYSY细胞 的作用 ，并与其结构类 似蛋 白一一 截短型 PrP(PrPA32—121)加以比较 。方法 通过 PCR方法获得人 PRND基 因及截短型 PRNP基 因并克 隆至真核表达载体 ，瞬时转染 SH—SY5Y细胞后 ，观察蛋 白表达及其定位情况 ；采用 MTT实验检测转染细胞的生长状 态 ；用流式细胞仪、Westernblot等方法检测转染细胞 的凋亡状态 。结果 两种蛋 白均可在转染细胞 中表达，并存在 于细胞膜上；MTT结果显示 ，在转染 24h后均出现明显 的细胞毒性作用 ；细胞凋亡相关实验发现 ，转染细胞 Annexin V／PI双染阳性细胞数量增多，pro—casepase一3和 Bcl一2因子水平降低。结论 瞬时表达 的Dpl蛋 白与截短型 PrP可产 生类似的神经细胞毒性作用 ，并诱导启动细胞凋亡过程。 关键词 ：doppel蛋 白；朊蛋 白；细胞毒性作用 ；细胞凋亡 中图分类号 ：R373 文献标志码 ：A 文章编号 ：1671-8259(2010)01-0032—04 Cytotoxieityofhuman doppelprotein andDpl—likeprotein PrPA32-121toSH-SY5Y cells XU Kun ，W ANG Xin。，TIAN Chan ，SHISong ，W ANG Gui—rong ， SHIQi，ZHOU Rui—min ，JIANG Hui—ying，CHU Yong一1ie ，DONG Xiao—ping。 (1．DepartmentofM icrobiologyandImmunology，MedicalSchoolof Xi’anJiaotongUniversity，Xi’an710061；2．StateKeyLaboratoryforIn：[ectious DiseasePreventionandContro1．NationalInstituteforViralDiseaseControlandPrevention， theChineseCenterforDiseaseControlandPrevention，Beiiing100052，China) ABSTRACT：Objective Toobservethebiologicalactivitiesofhumandoppel(Dp1)proteintransientlyexpressed andDpl—like protein PrPA32—121 on a human neuroblastoma cell linc SH．SY5Y． Methods Recombinant mammalianexpressionplasmidscontaininghumanPRND geneandtruncatedPrPA32—121fragme