先天性全身终毛增多症的遗传学定位和致病突变与研究.pdfVIP

·中文论著摘要· 先天性全身终毛增多症的遗传学定位和致病突变研究 -L上-_J一 刖 舌 先天性全身终毛增多症(congenitalgeneralizedhypertrichosis 是一种非常罕见的疾病，发病率未知，已报道的CGHT发病率大约在十亿分之一。 其特点是非雄激素依赖性全身性毛发过度生长，且不受性别、年龄和人种限制， 也就是人们常说的“狼人综合征”、“毛人”或者“毛孩”现象。从中世纪开始， 在不少文学和绘画作品中就有对CGHT患者的记载和描绘，可见普通大众和科学 家们一样，都对此拥有极其浓厚的兴趣。在达尔文时代，人们认为“毛人”是由 猿向人进化的中间阶段，因此把这种现象称做“返祖现象(atavism)”，并将其作 为进化论的证据之一。但几百年来，返祖现象的产生原因一直是一个悬而未决的 科学之谜。从目前研究结果来看，包括CGHT在内的大部分“返祖”患者实际上 是罹患了一种由未知的遗传缺陷引起，以表现类似人类祖先表型为特征的遗传病。 因此找剑导致CGHT发病的生物学基础，将有助于科学的解释这一历史悠久的自 然之谜。由于CGHT患者极少，具有良好研究价值家系十分罕见，加J二CGHT致病 基因具有高度遗传异质性，所以给候选基因定位研究带来困难。而传统的微卫星 全基因组连锁分析无法定位连锁区域较小的家系。所以深入的遗传学研究结果一 直鲜有报道。随着有高度学术研究价值的家系的收集，以及近年来刚刚兴起的高 分辨率基因芯片技术和全基因组连锁分析技术的应用，在全基因组范围内定位 CGHT致病基因候选区并进一步研究其发病机制成为了一种可能。遗传物质DNA 的很多种改变都会导致遗传病的发生。近年来科学家们检测到一种新的皋因组变 number 异形式，DNA){‘段拷贝数变异(copy 以上的DNA)}段的缺失、插入、重复等，它既可以是普通多念也可以是病理性的。 病理性CNV研究是以往的遗传病致病机制研究所未涉及的。个全新领域。当病理 性CNV的存住导致某些剂量敏感挂W发生缺失、重复、结构完整性破坏或者通过 远程位置作用影响CNV区域以外的基因表达时，将造成这些基因获得功能、失去 功能或者功能紊乱从而导致基因组疾病(genomicdisorder)发生。我们通过使用这 些目前国际领先的研究技术对收集到的三个CGHT家系进行基因定位研究，并进 二步对其致病原因进入深入探讨。 材料与方法 1、家系资料 收集家系，对家系中可能追溯到的家庭成员经知情同意后进行详细表型分析， 绘制家系系谱图，采集外周静脉血，提取基因组DNA。 2、对已知有关染色体区域的排除性定位分析 首先根据国际上己发表的文献，对已知的3号和8号染色体相关区域进行排除 性分析。利用UCSC基因组生物信息学网站在候选区内选择4对微卫星多态标记， PCR扩增家系I(SY)所有成员相应标记，PCR产物经变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和银 染，读出每个个体标记的基因型。再根据个体基因型和系谱中的亲缘关系，按照 孟德尔遗传定律推导出同一条染色体上不同标记构成的单体型来进行定位分析。 3、芯片仝基因组扫描定位致病基因候选区 根据实验手册标准流程，利用包含-j57，244个SNP的AffymetrixGeneChip@ Human 50K Hind MappingArray240，对INf弋19人家系l(sv)，进行全基因组扫描。 扫描后数据用AffymatrixGeneChipOperating GeneChipGenotypingAnalysisSoftware(GTYPE4．0)处理。结果输出成后续软件所 兼容的格式，进行进一步数据分析。 4、全基因组连锁分析 在常染色体显性遗传模式下，设定外显率99％，疾病等位基因频率0．1％，默 认SNP频率，用dChip连锁分析软件进行多点参数连锁分析。然后使用MERLIN， 2 5、验证和精确定位致病基因候选区 1-选取微11 根据基因组扫描所提供的位置信息结果，在染色体17q24．2．q24．3