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实验十 血糖的定量测定 Hagedorn-Jensen 二氏定糖法 一 .目的： 学习用Hagedorn-Jensen二氏微量滴定法测定血糖含量 二.原理 动物血液中的糖主要是葡萄糖，其含量较恒定。用硫酸锌和氢氧化钠除去被检测血中的蛋白质制成无蛋白血滤液。当将血滤液与定量且过量的标准铁氰化钾溶液共热时,一部分铁氰化钾还原成亚铁氰化钾，并与锌离子生成不溶性化合物，多余的铁氰化钾仍存在于溶液中。 向混合物中加入碘化物后，用硫代硫酸钠溶液滴定所释放的碘。即可知剩余的铁氰化钾量。血糖越多，剩余的铁氰化钾越少，所消耗的硫代硫酸钠也越少。 硫代硫酸钠溶液用量与血糖的关系可以由经验确定下来的数字表查出。此过程可以用反应式表示如下： K3Fe(CN)6+糖→K4Fe(CN)6+糖的氧化产物 2K4Fe(CN)6+3ZnSO4→K2Zn3[Fe(CN)6]2↓+3K2SO4 用碘量法测定剩余的标准K3Fe(CN)6: 2K3Fe(CN)6+2KI+8CH3COOH→ 2H4Fe(CN)6+I+8CH3COOK 2Na2S2O3+I→2NaI+Na2S4O6 三.器材： 1. 微量滴定管 2. 0.1毫升微量吸血管 3. 沸水浴 4. 50x90毫米大试管 四.试剂与材料 1. 0.45%硫酸锌溶液（新配制） 250毫升 2. 0.1摩尔/升氢氧化钠溶液（新配制） 50毫升 3. 0.005当量/升铁氰化钾碱性溶液 100毫升 用分析天平称化学纯铁氰化钾1.65克，溶解后加 入预先准备好的炼制无水碳酸钠10.6克，定容到1升。将溶液放在棕色瓶内，于阴暗处保存。 4. 氯-锌-碘溶液 取硫酸锌50克及纯氯化钠250克，定容到1升，作为母液。临用前根据所需要的试剂量加入碘化钾，使它在混合液中的浓度为25克/升。 5. 标准0.005当量/升硫代硫酸钠溶液 360毫升 临用时由标准0.1当量/升硫代硫酸钠溶液稀释 6. 3%醋酸溶液（不含铁） 100毫升 7. 1%可溶性淀粉溶液 20毫升 1克可溶性淀粉溶于10毫升沸水中然后加入90毫升饱和氯化钠溶液中。此溶液可作为大多数碘量 法滴定的指示剂，可长期保存。 8. 鸡。 五. 操作方法： 1. 取两个试管，各加入0.45%硫酸锌5毫升及0.1摩尔/毫升氢氧化钠溶液1毫升，此时产生氢氧化锌胶状沉淀。 2. 用微量吸管精确的吸取血液0.1毫升。擦去吸管尖端周围的血。将血吸入一个装有氢氧化锌的试管中，并仔细地用吸入和放出溶液的方法洗微量吸管三次。另一试管中加入0.1毫升蒸馏水为对照管 3. 将两个试管同时放入沸水浴中。准确煮沸四分钟后将二试管的内容物用滤纸分别过滤到两个大试管中，用蒸馏水冲洗沉淀和原来的试管两次，每次用水3毫升。将溶液并在一起。 4. 向每个试管用吸管精确的加入标准铁氰化钾碱性溶液2毫升，一同放入沸水浴中煮沸15分钟。 5. 冷却后分别加入氯-锌-碘溶液3毫升及3%醋酸2毫升混匀。并加淀粉液两滴。用标准硫代硫酸钠溶液滴定至蓝色消失为止。 6. 血糖含量的计算： 根据血糖值换算表将样品滴定值和对照滴定值折合成糖值。将此两糖值的差乘以1000，即为 100毫升血液血液中含葡萄糖毫克数。 表（书34页）列出了0.005当量/升硫代硫酸钠溶液的用量（毫升）和血糖含量（毫克/毫升）的换算关系。 表中最左边纵行中的数字是滴定时消耗的0.005当量/硫代硫酸钠溶液的毫升数的整数及小数后第一位。表中最上边的横行代表其小数后第二位数字，表中交叉点的数字为0.1毫升血液所含葡萄糖的毫克数。 * *