大豆根瘤菌培养基的优化和剂型的比较与研究.pdfVIP

摘要 本研究包括两个部分：第一部分为培养基的比较和优化。选取费氏中华根瘤 菌(Sinorhizobium 和豆芽汁等5种培养基中，筛选出适合根瘤菌生长发酵，又成本低廉的培养基。 用UV7501分光光度计测定HN01和USDAl10在供试培养基中生长的oD值，绘制 0D值曲线。结果表明：HNOI在TY、YMA、豆芽汁培养基中的生长速度相近，均 明显高于在PA和SM中的生长速度。USDAIl0在豆芽汁中生长速度撮快，其次是 TY和YMA，在YMA中生长较慢，在sM中的生长速度很低。 表明：HN01在BSE中生长的代时为2．4小时，在TY中生长的代时为3．3小时， 更适合作为发酵培养usDAllO的培养基。 由于USDAll0在YMA中的生长速度太低，进一步对YMA培养基进行了优化。 生长速度远快于在其它供试碳源中的生长速度。培养52小时后，USOAll0在葡 萄糖中的oD值达到1．05，在甘露醇中却只有0．68。在乳糖为碳源时的生长速度 最慢。以葡萄糖作为进一步优化的碳源，进行了L9(3‘)正交优化试验，方差分析 结果表明，葡萄糖和酵母粉对USDAll0生长的影响达极显著水平，K。HPO。和 0．1 996mi。 MgSO．·7H。00．29，NaClg，CaCl。0．059，Rh微量元素液4ml，dH20 进一步验证了USOAI10优化培养基与3号培养基和Y黼中的生长运度，证实优化 培养基的效果与3号培养基的效果相当，都优于YMA。 lO 第二部分为根瘤菌剂型的比较与优化。本研究制作了代表菌HN01和USDAl 的固体、浓缩液体与冻干菌剂，并比较其在贮存过程中的存活率。固体菌剂制作 了草炭、珍珠岩和蛭石三种剂型，室温下保存，定期取样，作稀释平板测数。结 果表明：在草炭菌剂中，HN01前15天增长较快，菌数达到初始菌数的4．5倍以 上，以后菌数开始下降，一个月后菌数下降到起始水乎，自F三个月的存活率较高， 超过三个月后，死亡率加快。USDAll0在草炭中的增长速度较慢，但是持续时间 较长，一个月后达到初始菌数的1．5倍左右，到2个月后，茵数下降到起始水平， 死亡速度也较HN01缓慢。在供试3种载体中，草炭要优于蛭石，蛭石又优于珍 珠岩。 利用离心法制作浓缩液体菌剂，测定其存活率。结果表明：在4C储存6个 HN01保存四个月后液体l和液体2的存活率分别为9．4％、9．6％，五个月之后 存活率分剐为5％和5．4％。USDAI10保存四个月后液体1和液体2的存活率分 5个月之后存活率只有4％左右，所以液体剂型可以保 别为12．2％和11．7％， 存3—4个月。氮气或真空对存活率的影响没有明显的差剐，液体剂型很有发展 前景。 冻干菌剂的研究结果表明：两j肄供试菌都在～209C下保存最好，4‘C下保存比 一20℃要差，但均优于室温保存。供试菌在制作冻干菌剂的过程中死亡率较高， HN01经常规冻干后的存活率为18．5％，液氮冻干后蔼钓存活率为33．9％。 USDAll0常规冻干后的存活率为22％，液氮冻干后的存活率为32．6％。由于制 作过程中大量的菌被冻死，冻干菌剂存活率著不高，HNO[在一20C：下保存3个只 10分别为3．8％和6．6％。供试菌在室 后，存活率分别为8，5％和8．9％，USDAl 温下保存7天后，活菌数快速降低，HN01和USDI1G常规冻干裁型分剐降为 7个活菌 67×106和2．9×107个活菌数／g，液氮冻于剂型降为54×105和8．5×10 液氮冻干剂型降为2．7×105和0．83×105个活菌数飞。因此，冻干菌剂不宜作为 生产根瘤菌剂的剂型，仅可作为菌种保藏之用。 USDAll0： 关键词：HN01； 剂型：生长曲线；根瘤菌；正交设计：存活率 Abstract This includedtwo