猕猴源肺炎链球菌分离和鉴定及FQ-PCR建立和在阐明其侵染机制与研究中的应用.pdf

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目 录 本文创新性研究工作………………………………………………………………。III 中文摘要……………………………………………………………………………..i Abstract…………………………………………………………………………………………………………iii 缩略词表………………………………………………………………………………、,i 前日Ⅱ 言…………………………………………………………………………………………………………….1。蓦……………………………………………………………………………………………………………. 1材料与方法………………………………………………………………………….5 1.1试验材料…………………………………………………………………………………。5 1.1.1菌株……………………………………………………………………………………………………….5 1.1.2试验动物…………………………………………………………………………5 1.1.3主要试验仪器……………………………………………………………………5 1.1.4主要购实试剂及其它配制试剂…………………………………………………5 1.2猕猴源肺炎链球菌菌株的分离和鉴定…………………………………………………7 1.2.1猕猴源肺炎链球菌菌株的分离………………………………………………。7 1.2.2猕猴源肺炎链球菌菌株的鉴定………………………………………………。7 1.2.2.1革兰氏染色镜检……………………………………………………………。7 1.2.2.2胆汁溶解试验………………………………………………………………。7 1.2.2.3奥谱托欣敏感试验…………………………………………………………..7 l-2.2.4小鼠毒力试验………………………………………………………………。7 1.3肺炎链球菌种特异性常规POR方法的建立……………………………………………8 1.3.1常规PCR引物的设计…………………………………………………………。8 1.3.2细菌培养…………………………………………………………………………8 1.3.3细菌基因组DNA的提取………………………………………………………9 1.3.4常规PCR反应的建立与优化…………………………………………………。9 1.3.5常规PCR的特异性试验………………………………………………………。9 1.4肺炎链球菌种特异性FQ.PCR方法的建立…………………………………………..9 1.4.1定量PCR引物……………………………………………………………………9 1.4.2 FQ.PCR标准品目的DNA的的制备…………………………………………10 1.4.3定量PCR的建立及反应条件的优化………………………………………….10 1.4.4定量PCR标准品目的DNA模板浓度的测定………………………………10 1.4.5定量PCR标准曲线的制作……………………………………………………1l 1.4.6 l FQ.PCR检测标准品模板的敏感性…………………………………………..1 1.4.7 FQ.PCR检测细菌数的敏感性………………………………………………。1l 1.4.8 FQ.PCR检测含有外源DNA背景的准确性…………………………………ll 1.4.9 l FQ.PCR的重复性试验………………………………………………………。l 1.4.10 2 FQ.PCR的特异性试验………………………………………………………l 1.4.11细菌分离鉴定、PCR与FQ.PCR的比较………………………………

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