中国人原发性胃癌的比较基因组杂交与研究.pdfVIP

独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工 作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地 方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含 为获得大连医科大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。 与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明 确的说明并表示谢意。 学位论文作者签名： 签字日期： 』年上月翌日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者及指导教师完全了解大连医科大学有关保留、 使用学位论文的规定，同意大连医科大学保留并向国家有关部门或机 构送交学位论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授 权大连医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据 库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位 论文。 论文作者签名： 匿垂笠 指导教师签名：垄窆鑫至二二一 签字日期：上生年』月塑日 中国人原发性胃癌的比较基因组杂交研究 硕士研究生： 唐英华 指导教师： 杨兴无教授 专业名称： 外科学 摘 要 目的：胃癌是我国常见的恶性肿瘤。目前认为，绝大多数胃癌是 从正常上皮细胞发展至胃癌的演变过程产生，其原因包括环境和基因 缺陷两方面等诸多因素。基因不稳在胃癌的发生中起着重要作用。它 组不稳又包括两种不同的形式，即染色体不稳(Chromosomal instability，CIN)和微卫星不稳(Microsatelliteinstability，MSI)。大多 数的胃癌中存在着染色体的不稳定性。表现为遗传物质的增多(Gain) 和丢失(Loss)。这种CIN的特点为我们进一步研究胃癌发生发展的 机制提供了研究方向。本课题旨在通过比较基因组杂交(Comparative genomichybridization，CG田技术发现中国人原发性胃癌反复的染色 体改变，以寻找与中国人胃癌发生发展相关的基因。 方法：(1)基因组DNA的提取：原发性胃癌20例标本经蛋白酶 列SDS消化，酚／氯仿／无水乙醇提取基因组DNA。(2)缺口平移标记法 标记探针：其中待检肿瘤DNA用绿色荧光标记，正常参照DNA用红 色荧光标记。(3)原位杂交和染色：将上述两个探针等量混合并杂交到 正常分裂期的染色体上并用DAIP进行染色体显带对照染色。(4)图象 device)数码相机和分 检测和分析：采用配备有CCD(Cooled．charged 别通过3种荧光滤光片并连接有一个图像处理系统的荧光显微镜分析 杂交结果。首先在荧光显微镜下选取待分析的染色体分裂相，每例标 本至少测4～6组分裂中期染色体，以其平均比值，绘制出表意图形(比 率曲线)。此曲线以1．O表示平衡状态，1．2被认为有显著的DNA 拷贝数增加：1．4表示染色体区域有高拷贝数的扩增；0．8则表示 有明显减少，染色体区带处的比率异常表示该部位有扩增或丢失。 结果：发现一些非随机性的染色体改变，包括20q(8例，40％)、 (1 的丢失。与国外资料相比，19号染色体DNA拷贝数的高频率丢失出 现在中国人原发性胃癌。 结论：结果提示20q、5p、lq、8q上可能存在与胃癌发生相关的 致癌基因；而19、5q、1p上可能存在其抑癌基因。19号染色体上则可 能存在与中国人原发性胃癌相关的抑癌基因。 关键词： 胃癌染色体比较基因组杂交 Comparativegenomichybridization analysis