IL-6在小鼠急性肝损伤后的肝细胞再生中的相关与研究.pdfVIP

中文摘要 IL．6在小鼠急性肝损伤后的肝细胞再生中 的相关研究 东南大学医学院 研究生：彭进 导师：赵刚副教授 摘 要 目的：通过小鼠肝部分切除术建立小鼠急性肝损伤的动物模型，观察不同时 间点肝损伤及肝再生的变化，探讨自介素一6(IL一6)在小鼠急性肝损伤后肝再生过 程中可能的作用。 康雄性IL一6基因敲除C57bl／j6小鼠(均购于南京大学模式动物研究所)体重 18—289，饲养于东南大学实验动物中心，自由饮水，随意迸食，12小时交替照 明。将小鼠分为对照组及实验组(IL一6基因敲除小鼠)，取5只小鼠作为空白对 照组用以测量小鼠正常肝重／体重比、各肝叶所占比例及小鼠血清川LT、AST、 GGT、AKP、Glu正常值范围，对照组与实验组每组小鼠25只，每组小鼠分为 重，分别于上午8：00—11：00予以l％戊巴比妥40mg／kg腹腔注射麻醉后参照 Higgins，Andersonnl和汤朝晖，吴孟超‘21等及MehrdadNikfarjam‘31的方法，切 除小鼠肝脏约70％，建立模型成功后，称切除肝脏湿重，并分别于术后 静脉采血O．8ml，室温静置30min后4000r／min离心5min，离心后留取血清检 尔马林固定，计算肝再生率及肝脏指数，并取肝脏组织进行苏木素一伊红(HE)染 色，研究肝再生过程中肝细胞形态学改变。每个样本随机取高倍镜下10个视野， 计数每个高倍视野下100个细胞中处于有丝分裂状态细胞或双核细胞所占比率， 中文摘要 以增殖细胞核抗原(PCNA)的免疫组织化学染色作为肝再生的指标，高倍镜下，每 张切片随机取高倍镜下10个视野，计数每个高倍镜下100个肝细胞中PcNA阳性 细胞数，细胞核呈棕色(无论其深浅)均视为阳性肝细胞。PCNA标记指数=PCNA 察5个视野，胞质内有棕黄色者为阳性细胞，计数每个高倍视野下阳性细胞数。 结果： HE染色：成功建立小鼠肝部分切除肝脏急性损伤模型后，实验组和对照组 术后肝组织均明显增生，HE染色光镜观察示，实验组与对照组术前肝组织切片 苏木素一伊红(HE)染色显示，术前正常肝小叶结构清晰，肝细胞索呈放射状排列， 肝血窦清晰，肝切除术后与术前比较，可见明显的组织增生，细胞体积变大，增 生的肝细胞索排列结构有不同程度紊乱，且双核细胞数目有明显增加，实验组与 对照组术后肝组织切片HE染色双核细胞计数较术前升高，对照组升高较实验组 较术前升高明显，有明显差异(P0．05)。实验组与对照组比较，对照组术后12h、 24h、36h各时间点双核细胞计数较实验组双核细胞升高明显，有明显差异 (P0．01)；实验组与对照组比较，对照组术后48h双核细胞计数较实验组双核 细胞升高明显，有明显差异(P0．05)。术后6h两组之间双核细胞数目比较无明 显差异(P0．05)。 肝再生率及肝脏指数：各组之间术后各时间点小鼠肝脏指数均小于正常组， 有明显差异(P0．01)，术后6h及术后12h实验组和对照组之间小鼠肝脏指数无 明显差异(P0．05)，术后24h、36h实验组小鼠肝脏指数小于对照组，有明显差 术后6h、12h实验组肝再生率均低于对照组，有明显差异(P0．05)；术后24h、 36h实验组肝再生率均低于对照组，有明显差异(PO．01)；术后48h实验组肝 再生率均低于对照组，两组间无明显差异(PO．05)。 血清学检测结果：术后血清中ALT、AST含量较术前明显升高，实验组与对 照组ALT均于术后12h达到高峰，然后开始下降，实验组ALT下降较对照组缓慢； 对照组AST于术后12h达到高峰后开始缓慢下降，而实验组AST于术后24h达到 Ⅱ 中文摘要 高峰，且峰值较对照组大；实验组与对照组术后各时间点血清中AST、ALT的含 量较术前有明显升高，有明显差异(PO．01)；术后36h实验组血清中ALT含量 高于对照组，有明显差异(P0．01)；术后48h实验组血清中ALT含量高于对照 照组，有明显差异(P0．05)；术后24h实验组血清中AST含量高于对照组，有 明显差异(P0．01)。小鼠肝