固有免疫识别受体RIG-IN端结构域对HBV复制的影响及其机制与研究.pdfVIP

中文摘要 关键词：乙型肝炎病毒 维甲酸诱导基因．I I型干扰素 中图分类号：R3 Bvirus，HBV)是一种很小的包膜病毒，属于DNA 乙型肝炎病毒(hepatitis 病毒科，HBV持续感染是导致慢性肝炎后肝硬化、肝细胞性肝癌等疾病的重要原 因，严重威胁着人类健康，目前全世界约有3．5亿慢性HBV感染者，约占全球人 口的6％，我国作为乙肝的高发流行区，占全球HBV表面抗原总携带率的近50％， 且60％的人受过HBV的感染。 固有免疫应答是机体抗病毒感染免疫的第一道防线，这一过程的启动需要 PRR(patternrecognitionreceptor，模式识别受体)识别病毒的某些成份，进而活 化下游的信号途径。在PRR中除了我们所熟知的Toll受体家族，近年来一类Toll induced 非依赖性PRR也成为固有免疫的研究热点，这其中RIG．1(retinoid gene—I， 维甲酸诱导基因I)因其表达谱广、识别病毒类型多而备受关注。研究证实RIG．I stranded 信号途径在dsRNA(doubleRNA，双链RNA)病毒的固有免疫应答过程 中发挥重要作用，其信号的传导主要由砌G—IN端CARD结构域(ⅪG．IN)介导， RIG—IN被活化后，可通过蛋白．蛋白结合方式，激活下游接头蛋白，进而活化 NF-kB和IRF(interferonfactor，干扰素调节因子)，最终引起干扰素 regulatory 和炎性因子的大量释放，发挥抗病毒效应。 固有免疫应答在I-IBV的抗感染过程中有着很重要的地位，Chisarin们等证实 TLR及其配体在体内可抑制舳V的复制，且这些TLR配体主要通过诱导I型干扰 素的产生而抑制船vDNA的合成。但目前并不清楚RIG．I信号途径在HBV抗感染 免疫中的角色。本研究中，我们利用HBV感染体内外模型研究RIG．IN对HBV复 制的影响，探讨RIG．I信号途径在HBV抗感染过程中的作用及其机制。 第一部分：pcDNA-RIG．IN质粒鉴定及HBV感染体内外模型的建立 在人染色体10qll-15，猪染色体 10q13。它有925个氨基酸，属于DEXD／H家族。 复旦大学医学院硕士论文 recruitment domain，半胱天冬酶招 RIG．I在N端包含一前一后两个CARD(caspase 募结构域)，这一结构域也为其他的胞内识别受体所具有，女[INODl、NOD2，C 可负调控RIG．IN介导的信号途径，研究表明RNA病毒一般为RIG．IHelicase结构 域识别，其信号由RIG．IN端结构域传导。 课题的第一部分是鉴定pcDNA．RIG．IN质粒并建立H_BV感染的体内外模型。 N端2．229位氨基酸，序列正确且在前 序结果显示在pcDNA载体中已克隆进RIG．I 面带有myc标签蛋白；为在体外检测RIG．IN对HBV复制的影响，我们首先建立 HBV感染的细胞模型，因嗜肝DNA病毒具有组织特异性，因此我们选取了分化 内，通过检测上清中HBV s抗原(HBsAg)和HBV e抗原(HBeAg)的表达量， 证实HBV在这两株细胞系中均可有效复制，从而建立HBV感染细胞模型。 体内我们通过高压注射法建立I-IBV感染小鼠模型，将pTHBV从尾静脉快速 注入正常啪／c小鼠体内，在注射后1、2、4、7、10天收集小鼠血清，用ELISA 天抗原水平已很难测到；以上数据证实高压注射法可建立HBV感染的体内模型。