喉癌细胞系肿瘤侧群细胞研究.pdf

复旦大学博士论文 中文摘要 喉癌细胞系中肿瘤侧群细胞的研究 第一部分人喉癌细胞系Hep一2和AMC-HN一8中侧群细胞的检测 和分选 目的探讨人喉癌细胞系中是否存在肿瘤侧群细胞及建立可靠的喉癌细胞系侧群 细胞(SP细胞)检测及分选的操作规程。 Hoechst33342， 5¨g／mL 方法以人喉癌细胞系Hep一2和AMC—HN一8为研究对象， 150 lJlnol／L维拉帕米，ll上g／mL碘化丙啶，应用流式细胞技术检测细胞系中SP细胞 的比例并对Hep一2中SP细胞进行分选并检测其纯度。以含血清培养基培养sP及 FIOrl—SP细胞及细胞爬片，观察细胞活性及培养后细胞形态。 拉帕米处理后比例分别降为0％及0．3±O．1％。流式细胞术分选Hep一2细胞SP的纯度 可达99．2±0．2％，non—SP细胞的纯度达98．5±0．5％；在含血清培养基中SP及 non-SP细胞均贴壁生长，死细胞少，爬片检查提示均为典型的鳞癌细胞表现。 结论喉癌细胞系中存在SP细胞，能被维拉帕米所抑制，流式细胞技术可有效的 分选SP细胞。 33342 【关键词】Hep-2细胞系；肿瘤干细胞；流式细胞术；侧群细胞；Hoechst 中图分类号R739．65 6 复旦大学博士论文 第二部分人喉癌Hep-2细胞系中肿瘤侧群细胞生物学特性 目的通过与non—SP相比较，研究喉癌Hep一2细胞系肿瘤SP细胞的生物学特性。 X 方法分选的1 104SP细胞及Eon—SP细胞以0．2ml无血清培养基种植于同一96 孔板上，在1、3、5、7d观察生长状态并用CCK-8法测定细胞的增殖状态，绘制 细胞生长曲线，比较两组细胞的增殖速度；分选后细胞在含血清培养基中培养的 0、4、8、12d用流式细胞仪动态测试SP细胞在培养体系中的百分比，以评估其 分化能力；分选的1×104SP细胞及non—SP细胞种植于同一96孔板上，培养1 天后以2Gy的剂量射线照射，2d后用CCK一8法测定细胞的增殖状态，计算射线对 细胞的抑制率，比较两组细胞对放射线的耐受性；将1×101，5×104及2×104 情况，比较两组细胞的致瘤性。 结果在无血清环境下SP细胞及non—SP呈不贴壁、球形、半透明状，培养后SP细 胞渐成簇生长，而non—SP细胞不能形成细胞球；在第1、3、5、7d时SP细胞的吸 1．675±0．07，而 光度分别为0．665±0．017，1．086±0．069，1．387±1．107， 0．951±0．0311．049±0．092，1．008±0．086，除 non-SP细胞为0．694±0．053 第1d外均具有显著性差异；分选后SP细胞在含血清培养基中培养的4、8、12d时 0．1％，4．7±O．4％和4．9±0．3％：经射线照射后SP细胞与noil一SP细胞的抑制率分 数为6，而nOD—SP不能成瘤(p=O．007)。 结论Hep一2细胞系中的SP细胞具有很强的增殖、分化、成瘤能力，对射线具有 耐受性，证明该SP细胞具有干细胞的相关特性，它富含肿瘤起始细胞。但同时 也说明SP细胞也是不均质的，我们不能将SP细胞认为是肿瘤干细胞。 【关键词】体外；扩增能力；分化能力；SCID小鼠；成瘤能力 中图分类号R739．65 7 复旦大学博士论文 第三部分 人喉癌Hep-2细胞系肿瘤侧群细胞中干细胞 相关基因的表达分析 1、Notch2及PTEN在