胡椒碱对脊髓损伤大鼠神经保护及作用机制实验与研究.pdf

中文摘要 胡椒碱对脊髓损伤大鼠神经保护及作用机制实验研究 摘 要 背景：脊髓损伤是神经外科常见疾病之一，虽经国内外多年研究，目 前尚无理想恢复神经功能的方法。依据目前对脊髓损伤病理发展过程的新 认识及胡椒碱药理作用的研究，我们设计本研究以观察胡椒碱是否具有对 脊髓损伤神经功能保护作用，并对可能的作用机制做进一步的探讨。以求 保护脊髓损伤后的神经功能的新方法。 第一部分胡椒碱对脊髓损伤大鼠运动功能保护作用的观察 目的：观察胡椒碱是否具有对脊髓损伤大鼠运动功能保护作用。 方法：(1)动物来源与分组：将36只成年雄性SD大鼠应用随机数字 表进行随机分组，分为4组，每组9只，分为假手术组，生理盐水组，胡 椒碱溶媒组，胡椒碱组。(2)大鼠脊髓损伤动物模型制作：所有组的大鼠 均在胸1O左右水平打开背侧脊柱棘突，生理盐水组，胡椒碱溶媒组，胡 椒碱组按照Allen’s法建立脊髓损伤模型，假手术组不进行脊髓损伤。(3) 媒)灌胃给药，胡椒碱溶媒组大鼠只给予7rnl／kg胡椒碱溶媒(含灭菌注射用 水、无水乙醇和聚乙二醇．400混合液)灌胃给药，假手术组和生理盐水组 大鼠给予7ml／kg生理盐水灌胃给药。每组大鼠都是在术后1d给予灌胃给 药，每天～次，持续14d。(4)大鼠脊髓神经功能测定：受试大鼠分别在术 时进行各组进行比较。术后14d受试动物麻醉后经左心室灌注4％多聚甲 醛磷酸缓冲液，取损伤部位5mm脊髓，用4％多聚甲醛液固定48小时， 常规石蜡包埋。(5)数据统计：本实验数据应用SPSSl3．0统计分析，数据 均为统计计量资料，符合正态的数据用；士S(均数±标准差)表示，否则用 中位数表示。多个样本均数比较，若数据符合正态性分布且方差齐则采用 one．way 中文摘要 U法。定P0．05为有显著性差异。 换的非参数检验的Mann．Whitney 结果： 组大鼠术后7d、14d的评分分别为(6．33士1．58，1 1．00-J：0．87)。胡椒碱溶媒组 各组术后14天较7天评分均有所恢复。 显著性差异。术后14d，假手术组的评分分别与胡椒碱组 84P=0．854， 媒组和生理盐水组之间比较均没有显著性差异(Z-．0．1 Z一0．509P=0．61 l、)，术后7d胡椒碱组分别与胡椒碱溶媒组和生理盐水组 Z=．3．621 P=0．000， 之间比较有显著性的差异(z--．3．485 P=0．000)，术后 14d胡椒碱组分别与胡椒碱溶媒组和生理盐水组之间比较有显著性的差 1P=0．000，Z=．3．616 异(Z=．3．62 P=0．ooo)。 结论：胡椒碱具有促进脊髓损伤大鼠运动神经功能恢复的药理作用。 第二部分胡椒碱促进脊髓损伤大鼠运动神经功能恢复作用机理研究 目的：探讨胡椒碱促进脊髓损伤大鼠运动神经功能恢复作用机理。 方法：(1)动物来源与分组、大鼠脊髓损伤动物模型制作、给药方式、 大鼠脊髓神经功能测定和数据统计同第一部分。于术后7d留取脊髓损伤 部位标本(同第一部分)。模型各组术后ld评分为0分则纳入实验。术后 髓损伤后的病理变化，原位末端标记法(TLrNEL染色)检测脊髓神经细胞 凋亡变化，免疫组织化学染色法检测caspase．3蛋白表达变化。 结果： lHE染色观察脊髓组织病理改变 中文摘要 假手术组脊髓组织完整，细胞排列整齐，未见明显坏死及空洞。生理 盐水组、胡椒碱溶媒组和胡椒碱组中，术后7d各组均有不同程度的组织 破坏，并有出血、水肿和空洞。胡椒碱组脊髓组织较连续。术后14d各组 明