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T细胞与K562细胞共培养的AFM观察.pdf

现 代 仪 器 洲 . moder ni nst r s . or g .cn T细胞与K562细胞共培养的AFM观察+ 金花 卜 ‘ 马淑媛1’2陈家楠1黄 训1赵宏霞1’3邢晓波1 蔡继业1 ’” 1.暨南大学化学系广州510632 2 .暨南大学第一附属医院广州5 10632 3 .广东工业大学轻工化工学院广州5 10090 摘要人类机体的免疫系统很难彻底清除肿瘤细胞,了解T淋 巴细胞杀伤肿瘤细胞的 整个过程的机理 ,将为提高免疫系统杀灭肿瘤 的效率提供知识基础。本文采用原子力显 微镜与倒置显微镜在细胞层面上观察T淋巴细胞进攻杀伤人慢性粒细胞性 白血病细胞 株一K562细胞 的过程,并对T细胞与K562细胞共培养前后 的表面形貌和生物机械性质 进行表征。结果显示,与培养前相比,共培养后2种细胞数 目之和减少,2种细胞的表 面形貌和机械力学性质均出现很大差异 ,表现为 :K562细胞,平均粗糙度 Ra 降低 , 细胞平均高度 Mh 降低,细胞表面出现5~8 cm的孔洞,有 的细胞甚至完全破裂溶解。 多个T细胞 的统计分析结果显示,共培养前,T细胞为静息状态 ,而共培养后Ra 和Mh 都显著增加。该方法为研究免疫系统与肿瘤相互作用的机制提供重要的切入点。 关键词T淋巴细胞K562细胞原子力显微镜 形貌特征变化,从细胞层面上为揭示T细胞对肿瘤 引言 细胞的杀伤机理和过程提供重要 的切人点和依据。 研究 已知细胞可以经过程序性死亡的过程 【l 】, 1材料与方法 如凋亡 a o t os i s 。近年来研究人员发现细胞的一 种非程序性死亡过程,即区别于细胞程序性凋亡, 1.1主要试剂与仪器 一种细胞侵入另一种细胞而 导致后者死亡的过程 ‘21, RPMI 1640培养液、Fi col l 分离液、胎牛血清 并命名为ent o si s ,即 “Wi t hi n ”的希腊文 。这种细 均购 自Gi bcoBRL公司 ,其余试剂或溶液均为 胞进入其它细胞的作用 c el l i n cel l s t r uct ur e ,即 分析纯。倒置荧光显微镜 I nver t ed Mi cr os co e , 活细胞 。钻入”另一种细胞,并且可以在其 中活动, Ni kon TU一2000。原子力显微镜 AFM ,Aut oPr obe 甚至可以钻出该细胞。人体 内淋巴细胞抗击癌变 CP Res ear ch ,美国Ther momi cr osco e公司 。 的过程就是典型 的现象,淋 巴细胞在与其他细胞 1.2 K562细胞的复苏与培养 接触过程 中会进入后者胞浆中。1864年,Eber t h 液氮中冻存的K562细胞复苏,以2 X 10 6 /mL 发现淋巴细胞钻人肠上皮细胞。1956年Humbl e l 接种于培养瓶内,培养液为含12 %新生牛血清 等描述淋 巴细胞侵入其他细胞并在其胞浆 中活动 的RPMI 1640 ,于37 ℃、5 %C02孵育箱 中培养 , 的现象。王小宁H1等也系统地描述免疫细胞进 出 2- 3天换液一次。 肿瘤细胞的现象,而且发现进入肿瘤细胞的淋巴细 1.3人外周血T淋巴细胞 T Lym hocyt e Cel I 。 胞不但可再出来,而且可从内部杀伤肿瘤细胞。现 简称Tc 的分离 已知淋巴细胞可伸人巨噬细胞,人或小鼠肠柱状 抽取健康志愿者外

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