原创力文档- 1、原创力文档（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。。
- 2、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击 这里二次下载。
- 3、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
- 4、该文档为VIP文档，如果想要下载，成为VIP会员后，下载免费。
- 5、成为VIP后，下载本文档将扣除1次下载权益。下载后，不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
- 6、成为VIP后，您将拥有八大权益，权益包括：VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
- 7、VIP文档为合作方或网友上传，每下载1次， 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等，对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
查看更多
DNA 提取：
原理：通常采用机械研磨的方法破碎植物的组织和细胞，由于植物细胞匀浆含有多种酶类(尤
其是氧化酶类)对DNA 的抽提产生不利的影响，在抽提缓冲液中需加入抗氧化剂或强还原剂
(如巯基乙醇) 以降低这些酶类的活性。十二烷基肌酸钠(sarkosyl) 、十六烷基三甲基溴化铵
(hexadyltrimethyl ammomum bromide，简称为CTAB)、十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate，
简称 SDS)等离子型表面活性剂，能溶解细胞膜和核膜蛋白，使核蛋白解聚，从而使 DNA
得以游离出来。再加入苯酚和氯仿等有机溶剂，能使蛋白质变性，并使抽提液分相，因核酸
(DNA、RNA)水溶性很强，经离心后即可从抽提液中除去细胞碎片和大部分蛋白质。上清液
中加入无水乙醇使DNA 沉淀，沉淀DNA 溶于TE 溶液中，即得植物总DNA 溶液。
方法一：CTAB 法：
取新鲜菊花嫩叶0.2~0.3 g （置于封口袋中）
加入提取液I 1.5 ml
平放桌上用研钵研磨
液体和残渣转到1.5 ml 离心管中,离心 （12000 rpm,4℃,5 min）
倒去上清液
加入提取液I 300 µl
加入提取液Ⅱ 300 µl
震荡悬浮 （用枪把沉淀搅起,用手激烈震荡）
加入5%十二烷基肌氨酸钠 120 µl
（sodium N-lauroyl sarcosinate ）
水浴 （65℃,10 min）
加入氯仿异戊醇 （24:1 ） 600 µl
震动抽提15 min, 离心 （12000 rpm, 20℃, 5 min）
吸取上清液600 µl 至新的1.5 ml 离心管
加入异丙醇600 µl
用手轻轻振荡,DNA 开始沉淀,静置5 min, 离心 （12,000 rpm, 4℃, 5 min）
倒去上清液,加入70% 乙醇500 µl 洗涤
离心 （12,000 rpm, 4℃, 5 min）
倒去上清液, 自然干燥
加入50 µl 1%TE 溶解, -20℃保存
DNA 提取试剂配制
提取液I （100 ml）：
0.35 M 山梨醇
文档评论（0）