流动注射与毛细管电泳-化学发光检测联用系统及微型化研究.pdf

查韭盔兰塑主堂焦堡苎 垫星 流动注射与毛细管电泳．化学发光检测联用系统 及微型化的研究 摘要 本论文主要是对流动注射与毛细管电泳．化学发光检测的联用系统及毛细管 电泳一化学发光检测的微型化进行研究。其目的是为了建立针对于低浓度样品自 动、快速、连续分析的微流控分离分析系统创造条件。全文由四章组成。 第一章中，回顾了CE．CL系统的发展，对CE．CL系统各种不同的结构进行 了综述，简单概括了FI．cE联用系统的意义和进展。(概述了微流控系统的历史和 现状，并展望了FI与微芯片cE．CL／ECL联用系统未来发展的潜力。卜—z歹7 第二章是关于微型化的FI．CE-CL联用系统的研究。本论文中，首次在价廉 易制作的H一型通道芯片上实现了CL检测。首次将FI与CE—CL系统相联，实现 了cE．cL系统中分析样品连续自动化的引入过程。(对于出口端必须接地的cE体 系，FI．CE落滴型分流接口在实现CE连续样品引入的同时，有效地实现了FI系 统与CE高压电场的隔离。鲁米诺添加到运行缓冲液中，毛细管出口端的阴极池 也作为CL反应／检测池，用注射泵将CL试剂H202连续地引入到池中。在如FI． CE这样连续分析的系统中，CL反应会因为反应局部试剂浓度的改变受到影响。 本论文中反应／检测池中的试剂不断更新，有效地解决了这一问题。CL反应发光 由石英光纤收集并传递给光电倍增管。将光纤置于CL池中，距离毛细管出口湍 300 I．tm，与毛细管同轴放置。实验结果表明，CL信号和系统的分离效率几乎不 受柱端试剂流速的影响，这有利于营建FI．CE—CL这一稳定、耐用的分析系统。 S 9次连续进样峰高的精度可达到1．9％RSD。厂D 第三章在第二章的基础上建立了平板上的FI—cE．ECL分析系统。／这是首次实 现毛细管电泳一电致化学发光检测系统与FI样品连续引入系统联用。扔使用落滴 型接口实现CE连续进样和FI与CE的电隔离。毛细管尾端的阴极池作为ECL反 应／检测池。 ECL试剂以共轴 分离毛细管尾端插入ECL试剂Ru(bpy)32+液流中， IJ 查j!查堂堕主堂垡堡塞 一一——!!星一 剂浓度稳定，而且易集成到微流控CE系统中。 I．tm内径毛细管分离的样品，证明了用于将ECL反应从cE高压电场分离的在柱 电接头是不必要的。 L光的光纤直径(1 用于收集EC mm)显著大于毛细管内径(50“m)，使ECL 光的收集更为有效。毛细管出口、工作电极和光纤的相对位置会影响样品与电生 试剂之间的混合和光的收集效率，影响到系统的灵敏度和分离效率，因而对三者 之间的相对位置进行了优化。 以氨基酸为模型化合物考察微型化的FI．CE—ECL系统的性能。三种氨基酸在 1．0kV下180S内基线分离。脯氨酸，缬氨酸和苯丙氨酸的检出限(3a)分别为1．2， 50，25 pan，峰高的精度分别为1．4％，5．4％和4．3％RSD lamol／1，板高为14，28，21 (n=9)。通过短管的快速分离与不间断电压cE自动连续进材目结合，微型化的 FI—cE—ECL系统可以达到每小时50样的高分析速度。．}／一D 为了满足分析仪器小型化和集成化的需要，在第四章中设计并以微加工技术 mm的微芯片上进 过程中采样、分离以及样品和试剂的混合在一块58×16×3．4 行。利用第三章的研究结果，没有使用在柱电接头，对CE分离的样品直接进行 ECL测定。ECL试剂池集成在芯片上，电渗流为驱动力推动试剂在通道中流动的 方法，可达到灵活稳定的目的。