土壤中PVA降解菌的分离与筛选.pdfVIP

西 安 工 程 大 学 学 报 JournalofXi’anPolytechnicUniversity 第 28卷第 3期 (总 127期) 2014年 6月 Vo1．28，No．3(Sum．No．127) 文章编号 ：1674—649X(2014)03—0325—04 土壤 中PVA降解菌的分离与筛选 强雪妮，郭雅妮 ，杨 贞 (西安工程大学 环境与化学工程学 院，陕西 西安 710048) 摘要：以含 PVA的土壤作为菌种来源，PVA为唯一碳源，在相 同培养条件下，采用I2-KI及硼酸 染色法进行初筛，再通过测定 PVA 降解效率的方法进行复筛．初筛得到PVA 降解 菌6株，复筛 得到 4株单一的PVA降解菌 A，C，E，F，降解效率在 48 ～61 之间．通过对 4株 PVA降解单 菌进行生理生化实验鉴定出A为假单胞茵属 ，c为球菌属 ，E为微球菌属 ，F为链球菌属． 关键词：聚 乙烯醇；混合菌系；筛选；土壤 中图分类号：X172 文献标识码 ：A 聚乙烯醇 (PVA)是一种人工合成 的水溶性高分子聚合物 ，具有 良好的水溶性、成膜性、黏结性 ，被广 泛应用于纺织、印染、化纤等多个领域 ．但由于其化学耗氧量大 ，可生化性差，生物降解周期长 ，每年有 大量 的PVA废水产生 ，造成了严重 的环境污染 ，极大地危害了生态环境．因此，PVA废水 的治理受到越 来越多人的重视 ，其中生物处理方法具有降解效率高且无二次污染等优点，因此得到了学者们的广泛关 注[3]．筛选 出能降解 PVA 的优势菌 ，对于含 PVA废水土壤的处理具有十分重要的意义． 目前国内外许多学者分离出多株降解 PVA 的微生物[4]，其中以假单胞菌属较多，芽孢杆菌和不动 杆菌较少．同时还有学者对微生物降解 PVA 的机理、提取和纯化 PVA降解酶也进行了相关研究 ．但 大多数关于微生物降解 PVA 的研究多以水体中的降解菌为主，对于土壤 中的PVA降解菌的研究不是很 多．本文从含 PVA土壤中分离筛选 出能降解 PVA 的菌株，并对其进行生理生化鉴定 ，以期为 PVA 的生 物降解寻找新 的菌种来源 ，完善土壤微生物降解 PVA 的理论依据． 1 实 验 1．1 菌种 菌种来 自于含 PVA的土壤样品． 1．2 材料 1．2．1 试剂 (1)PVA(化学纯 ，醇解度为 99．8 ～100 ，天津科密欧化学试剂有限公司)，其他试剂均 为分析纯． (2)硼酸～碘一碘化钾显色剂：I液：称取 2．5gKI，置于 100mL棕色容量瓶 中，加蒸馏水溶解后称取 0．65g碘加入其中，定容备用．Ⅱ液：称取 4g硼酸置于 100mL容量瓶，定容至刻度．将 I液和 Ⅱ液按 1：5 收稿 日期 ：2014—02—24 基金项 目：陕西省科技厅科学技术研究发展计划项 目(2010K02—10)；陕西省教育厅专项科研计划项 目(O9JK448) 通讯作者：郭雅妮 (1972一)，女，陕西省洛南县人 ，西安工程大学教授，硕士．E-mail：guoyani2002@163．corn 326 西 安 工 程 大 学 学 报 第 28卷 比例(1mLI液和 5mL11液)混合即成． (3)细菌形态观察及生理生化实验所用试剂参见文献[11]． 1．2．2 培养基 (1)筛选培养基 ：PVA 1．0g，NH4C11．0g，酵母膏 0．1g，KH2PO 0．2g，K2HPO 1．6g， MgSO4·7H2O0．05g，FeSO4·7H2O0．02g，CaC120．05g，NaC10．02g，蒸馏水 1000mL，pH一7．2，121。C 灭菌 20min． (2)发酵培养基 ：PVA2．0g，NH4C13．0g，KH2PO40．25g，K2HPO42．0g，MgSO4·7H2O0．06g，Fe— sO4·7H2O0．02g，CaC120．05g，NaC10．02g，蒸馏水 l000mL，pH一7．2，121．~C灭菌 20min． (3)种子培养基 ：PVA1．0g，酵母膏 1．6g，KH2PO40．2g，K2HPO41．6g，MgSO ·7