利用电子克隆技术获得基因.docVIP

利用电子克隆技术获得基因 【实验目的】 1．理解电子克隆的原理和应用。 2．掌握利用生物信息数据库进行电子克隆的操作过程。 【实验原理】 基于表达序列标签（expressed sequence tags，ESTs）的电子克隆（in silico cloning）策略，是近年来发展起来的一门快速克隆基因的新技术，其技术核心是利用计算机技术，依托现有的网络生物信息数据资源EST数据库、核苷酸数据库、蛋白质数据库、基因组数据库等，采用生物信息学方法（包括同源性搜索、聚类分析、序列拼接等）组装延伸ESTs序列，以期获得部分乃至全长cDNA序列的一种方法。进一步利用RT-PCR的方法进行克隆分析、验证。 随着EST数据库的进一步完善，电子克隆策略已成为克隆新基因的重要方法，并成功地应用于人类基因组的研究。利用EST资料的电子克隆是克隆功能基因的新途径，与传统的基因克隆方法相比，具有快捷、成本低、针对性强等特点，但也受到dbEST的EST数量和质量的限制，因此在EST资料非常丰富的模式物种（如人、鼠等）中应用较多。在实际应用中，以模式物种某一已知基因序列为起点，结合目标物种EST数据库，采用现代生物信息学及实验验证相结合的技术方法，尤其是通过同源性比较完全有可能快速筛选到一些具有重要功能的基因。 电子克隆的方法与策略图-1）： 1. 选择感兴趣的EST作为查询探针，查询dbE