凡纳滨对虾胚胎发育时序及特征与研究.pdfVIP

凡纳滨对虾胚胎发育的时序及特征研究 0、 引言 【研究意义】凡纳滨对虾（Litopenaeus vannamei ）又 名南美白对虾，是迄今世界养殖产量最高的优良虾种，因其 具有壳薄体肥、肉质鲜嫩、生长迅速、群体生长均匀、抗病 力强等优点，深受国内外市场的青睐（林琼武等，2006； Aloise et al.，2011；彭金霞等，2013 ）。 开展繁殖生物学研究、完善苗种培育技术及制定人工育 苗标准化操作规范，是实现凡纳滨对虾人工规模化繁育的有 效途径；而确立不同温度下受精卵第一、第二极体释放时间， 是开展凡纳滨对虾雌核发育诱导及后续细胞工程育种研究 的重要基础。因此，有必要深入开展凡纳滨对虾的胚胎发育 生物学研究。【前人研究进展】随着国内外对虾增养殖业的 迅猛发展，以提升养殖产量和品质为主要目标的染色体组工 程已成为对虾育种研究的重点领域（Garnica-Rivera et al.， 2004；Sellars et al.，2010；Aloise et al.，2011 ）。 目前，有关对虾胚胎及幼体发育的研究集中在形态描述 （Garc ía-guerrero and Hendrickx，2009；栗治国等，2013 ）， 且发现水温变化是对虾繁殖和生长发育的关键因素（彭昌迪 等，2002 ），在生长、存活、生理生化和能量代谢等方面均 已得到证实（Chen andLai，1993；Wyban et al.，1995； Kumlu et al.，1995；李庭古等，2006 ）。国内已有学者对 红螯螯虾、凡纳滨对虾、克氏原螯虾和脊尾白虾等的胚胎发 育过程进行了观察和描述（孟凡丽等，2000；彭昌迪等，2002； 吕建林等，2006；栗治国等，2013 ）；国外学者则主要针对 罗氏沼虾和长臂虾科4 种对虾的胚胎发育进程及发育形态特 征进行观察（M üller et al.，2004；Garc ía-guerrero andHendrickx，2009 ）。有关对虾雌核发育的研究国内外鲜 见报道，仅见国内学者在20 世纪90 年代进行了一些试验性 尝试（戴继勋等，1993；蔡难儿等，1995；陈本楠等，1997）， 但至今未获得对虾雌核发育诱导技术的突破。【本研究切入 点】凡纳滨对虾卵子染色体加倍是雌核发育诱导的两大技术 之一，而受精卵极体释放时间又是染色体加倍成功与否的关 键，目前在国外虽有相关研究报道（Garnica-Rivera et al.， 2004；Aloiseet al.，2011 ），但因品种和环境条件差异而 尚无定论。【拟解决的关键问题】以广西水产科学研究院选 育获得并拥有自主知识产权的国审水产新品种（登记号 GS-01-001-2012 ）———凡纳滨对虾“桂海 1 号”为研究对 象，对该品种不同温度下受精卵发育时序进行观察，旨在了 解凡纳滨对虾胚胎发育的时序及特征，尤其是第一极体和第 二极体排出的时间点，为其雌核发育诱导中染色体加倍最佳 操作窗口的确定及人工苗种生产提供参考依据。 1、 材料与方法 1. 1 亲本来源及孵化用水处理 雌雄亲虾为广西水产科学研究院国家级SPF 南美白对虾 良种场车间内人工培育至性腺成熟的桂海1 号，其中，雌虾 体重 60.47 〒1.79 g，体长20.27 〒0.64 cm；雄虾体重44.13 〒2.02 g，体长18.00〒0.53 cm。自然海水经暗沉淀、砂滤， 双层棉滤袋过滤两次后再用滤器过滤 3次，并以甲醛和优乐 碘分别杀菌，EDTA 钠盐螯合重金属离子（彭昌迪等，2002 ）。 1. 2 胚胎发育观察 从雌虾池中挑选已成功交配贴荚的雌虾（背部暗红色性 腺线条连续且清晰），臵于 500 L 的玻璃圆桶内待产卵，水 温控制在（30.0 〒0.5）℃，盐度28.6‰，避光，不充气， 产卵后移走亲虾，并及时采集受精卵进行连续显微观察。具 体操作：先在直径 4 cm 的细胞培养级平皿中用微吸管或枪 头吸取1 滴经净化消毒灭菌的海水（20.0 μL ），保持液滴 在平皿中不扩散，呈球形液滴，然后吸取细胞培养级矿物油 将该海水液滴完全覆盖，使海水液滴完全包裹于矿物油中， 防止挥发扩散。在解剖镜或光学显微镜下，用玻璃毛细管小 心挑选吸出 3枚正常的受精卵，将其小心移入海水液滴中， 随后调整物镜，并设臵拍照时间进行连续拍照，中途无需添 加海水，但需定时观察确认显微镜物镜镜头是否正位，如移 位则进行微调（孟凡丽等，2000 ）。 1