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转氨酶转氨基作用的鉴定.ppt
* * 用纸层析法鉴定转氨酶的转氨基作用 二、基本原理 转氨基作用广泛地存在于机体各组织器官中，是体内氨基酸代谢的 重要途径。氨基酸反应时均由专一的转氨酶催化，此酶催化氨基酸的 α－氨基转移到另一α－酮基酸上。各种转氨酶的活性不同，其中肝 脏的谷丙转氨酶（Glutamic Pyruvic Transaminase ,GPT）活性较 高，它催化如下反应： α—酮戊二酸 + 丙氨酸 GPT 谷氨酸 + 丙酮酸 本实验以丙氨酸和α-酮戊二酸为底物，加肝匀浆保温后，用纸层析 法检查谷氨酸的出现，以证明转氨基作用。 一、实验目的 掌握纸层析法鉴定转氨酶转氨基作用的原理和方法 1．匀浆制备 2支试管 测定管① 对照管② 肝匀浆0. 5ml 0.1mol/L丙氨酸0.5 ml 0.1mol/Lα-酮戊二酸0.5 ml 0.01mol/L pH 7.4磷酸盐缓冲液1.5 ml 肝匀浆0. 5ml 37℃保温，1小时 三、操作步骤 肝0.5克+0.01mol/LpH 7.4磷酸盐缓冲液2.5 ml, 研成匀浆 2．酶促反应过程 加热 沸水浴中煮5分钟 离心2000rpm 5分钟 上清液供层析用 3．层析 丙氨酸液2 谷氨酸液4 测定液1 对照液3 1 2 3 4
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