Kai1对人喉癌Hep-2细胞株增殖及生长周期的影响.pdf

重庆医科大学学报2010年第35卷第4期 (JournalofChongqingMedicalUniversity2010．Vo1．35No．4) 一 519一 _基础研究 文章编号：0253—3626(2010)04—0519—03 Kail对人喉癌Hep-2细胞株增殖及生长周期的影响 王洪鹏 ，叶 琳 2，黄 闯1，王 驰 3，谭 毅 ，陈鸿雁 (1．重庆医科大学附属第一医院耳鼻喉科，重庆 400016；2．重庆医科大学附属第一医院胸心外科，重庆 400016；3．重庆医科 大学药学院药物化学教研室，重庆 400016；4．重庆医科大学动物实验中心，重庆 400016) 【摘 要】目的：探讨肿瘤转移抑制基因Kail对人喉癌Hep一2细胞株增殖能力及生长周期的影响。方法：本研究以喉癌Hep一2细 胞株为研究对象，将携带有 Kail基因的重组腺病毒 (rAd—Kail)进行扩增 、纯化并测定其滴度，用适量rAd—Kail转染人喉癌 Hep一2细胞株，利用RT～PCR技术对转染效果进行检测，以未转染Kai1的喉癌细胞株为对照组，用四甲基偶氮唑蓝 (MYr)法、流 式细胞术测定转染组细胞株的增殖抑制率和细胞周期。结果：rAd—Kail经扩增、纯化后 ，滴度可达 10mPFU／ml，当病毒量为 30MOI时，对 Hep一2细胞的转染率达93％以上。Mqq实验显示转染Kail的Hep一2细胞株体外增殖能力明显弱于对照组(P0．01)， 抑制率可达29％。流式细胞术显示与对照组比较，转染组GJG期细胞数量增加，S期细胞数量减少 ，差异有显著性(尸lO．05o结 论：通过重组腺病毒介导，成功地将Kail基因转入喉癌Hep一2细胞株，Kail对喉癌细胞体外增殖能力具有抑制作用，其机制可能 是将Hep一2细胞生长周期阻滞于G0／G。期，提示 ：Kai1抑癌基因可能通过阻滞肿瘤细胞生长周期实现抑制肿瘤细胞增殖。 【关键词】Kail／CD82；Hep一2；喉癌；腺病毒 ；转染；增殖；生长周期 【中国图书分类法分类号】R739．65 【文献标识码】A 【收稿 日期】2009—10—20 EffectofgeneKailontheproliferationandcellcycleoflaryngealcarcinoma Hep一2cellIine WANGHong-peng etal (DepartmentofOtolaryngology，theFirstAffiliatedHospital，ChongqingMedicalUniversity) 【Abstract】Objective：TostudytheeffectofgeneKailontheproliferationandcellcycleoflaryngealcarcinomaHep-2cellline． Methods：TheHep-2celllinewasusedasthesubject，theexpansionpurificationandtheconcentrationoftheKailgenewastested，and thegenewastransferredintoHep一2celllinebyadenovirus．Thenon-transfe~edgroupwasusedasacontro1．BymeansofM1rrtheeffect ofKailgeneonthecellproliferationofHep——2celllinewastestedandbymeansofRT——PCR theexpressionofKailintransfectedcellwas tested；cellcycleofHep-2cellswasassayedbyflowcytometry．Results：TheconcentrationofKaiIgenecanbe10。PFU／mlafter expansionandpurification，whentheconcentrationoftheadenovirusWas 30MOI，htetransfectionrateofHep-2celllinecanbeabove 93％．MITshowsthecel