SiRNA-Smad3沉默人瘢痕疙瘩成纤维细胞中Smad3对纤维连接蛋白及Ⅰ型胶原表达的影响.pdf

一 522 一 重庆医科大学学报2010年第35卷第4期 (JournalofChongqingMedicalUniversity2010．Vo1．35No．4】 文章编号：0253—3626(2010)04—0522—05 SiRNA—Smad3沉默人瘢痕疙瘩成纤维细胞中Smad3对纤 维连接蛋白及 I型胶原表达的影响 刘 波 ，果 磊 (重庆医科大学附属第一医院烧伤整形外科，重庆 400016) 摘【 要】目的：探讨SiRNA—Smad3沉默人瘢痕疙瘩成纤维细胞(Keloidfibroblast，KFB)内Smad3基因后，对KFB细胞内纤维连 接蛋白及I型胶原表达水平的影响。方法：分别用针对人 Smad3mRNA基因的特异性干扰片段和无关干扰片段转染体外原代 培养的人KFB，经RT—PCR、Westernblot、免疫组化、免疫荧光方法检测纤维连接蛋白(fibronectin)及 I型胶原 (CollagenI，ColI) 等KFB细胞外基质的合成和分泌情况。结果：75nmol／LSmad3一siRNA特异性干扰片段转染KFB48h后KFB细胞内ColI及FN 合成和分泌较非特异性对照组及空白对照组明显降低。结论：Smad3一siRNA可特异性抑制KFB细胞中Smad3基因表达，并有 效抑制体外培养的人原代KFB合成和分泌ColI及纤维连接蛋白(Fibronectin，FNo 【关键词】RNA干扰；Smad3；瘢痕疙瘩；成纤维细胞 【中国图书分类法分类号】R619．6 【文献标识码】A 【收稿 日期】2009—06—09 EffectsofSiRNA—．mediatedSmad3genesilenceontheexpressionof fibronectinandcollagenIinhumankeloidfibroblasts jUBo，etal (DepartmentofBurnandPlasticSurgery，theFirstAffiliatedHospital，ChongqingMedicalUniversity) A【bstract]Objectives：ToexplorertheinfluenceofsiRNA-Smad3-mediatedSmad3genesilenceontheexpressionoffibroneetinand collagenIinhumankeloidfibroblasts(KFB)．Methods：OnespecificSmad3一siRNArfagmentnadanotherirrelevnatsiRNArfagmentwas respectively trnasfected intohuman primaryKFB cells．RT-PCR，Western blot，immunohistochemistynad immunofluorescencewere employedtoevaluatethechangesineithertheexpressionorhtesecretionofbothfibronectinandcollagenI．Restu／ts：Theexpressionnad secretionofboththefibronectinandcollagenIinKFBwereinhibitedsignificnatlybyhtetreatmentofSmad3一siRNAfor48hoursata finalconcenrtationof75nmol／Lascomparedwiht thoseoftheuntreatedorhteirrelevantsiRNA fragmentrteatedgroup．Conculsion： Smad3-siRNA couldbeemployedtospecificallyinhibittheSmad3geneexpression inKFB cellsandtoefficientlyinhibitboht hte synhtesisandsecretionoffibronectinandcollagenI． K【eywords