siRNA介导的Plk1表达沉默对COS-7细胞影响的研究.pdf

一 324 一 重庆医科大学学报2010年第 35卷第3期 (JournalofChongqingMedicalUniversity2010．VOI．35No．3) i基础研究 文章编号：0253—3626(2010)03—0324—03 siRNA介导的Plkl表达沉默对 COS一7细胞影响的研究 朱 江 ，洪苏玲 1，柯 霞 ，兰 欢2，1、友泉 z (重庆医科大学 1．附属第一医院耳鼻咽喉科；2．分子医学与肿瘤研究中心 ，重庆 400016) 摘【 要】目的：研究(Polo—likekinase1，Plk1)表达被抑制后对COS一7细胞的影响，探讨PlkI作为分子靶点用于肿瘤治疗的潜 在价值。方法：化学合成法合成特异性的短链PlklsiRNA，脂质体转染法将短链 siRNA分别导人COS一7细胞；采用 RT—PCR和 Westernblot法检测 siRNA对Plkl表达的抑制效果 ；采用胎盘兰染色结合细胞计数法、FACS分析siRNA介导的PlkI表达抑制 对COS一7癌细胞生长增殖 、细胞周期的影响。结果：半定量RT—PCR和蛋白质印迹分析结果表明，合成的特异性短链Plkl siRNA在 mRNA和蛋白质水平上均能高效 、特异性地抑制COS一7细胞中Plk1的表达。细胞生长分析结果表明，siRNA介导的 Plkl表达沉默导致COS一7细胞的生长增殖受到显著抑制。FACS分析结果表明，Plk1表达被抑制后，出现细胞周期停滞 ，大量细 胞呈现sub—G1期时相。结论：siRNA介导的PlkI表达沉默显著抑制COS一7细胞生长增殖，是一个潜在的肿瘤治疗靶点。 【关键词】Plk1；siRNA；细胞周期；细胞生长 【中国图书分类法分类号】R73 【文献标识码】A 【收稿日期】2009—12—10 TheeffectsofsiRNA—．mediatedPlkldepletiononCOS—．7cells ZHUmmg，etal (DepartmentofOtolaryngology,theFirstAffiliatedHospital，ChongqingMedicolUniversity) A【bstract]Objective：ToinvestigatetheeffectsofsiRNA—mediatedPlk1depletiononCOS一7ceilsandthetherapeuticpotentialofPlklin cancertreatment．Methods：SmallinterferingRNA (siRNA)wereusedtospecificallydepletePlk1inCOS-7cells．RT—PCRand immol／LunoblottinganalysiswereusedtOverifytheinhibitoryeffectofsiRNA againstPlk1．TrypanblueexclusionassayandFACSanalysis wereconductedtodeterminetheeffectsofPlk1depletiononthegrowthandcellcycleprofileofCOS一7ceils．Results：SyntheticsiRNA duplexesagainstPlk1wereintroducedintoCOS-7cells，whichsubsequentlyresultedinasignificantinhibitioninPlklexpressioninthe cells．CellgrowthassayindicatedthatsiRNA—mediatedPlk1depletion significantlyinhibitedtheproliferationofCOS-7cells．FACS analysis revealed thatPlk1 depletion caused cellcycle arrest，resulting into large population of sub—G1 cells．Conclusion： siRNA-mediatedPlkldepletionsignificantlyinhibitedtheproliferationofCOS-