不同PCR方法检测布鲁菌阳性样本的敏感性分析.pdf

2O10，26 (4) 中 国 人 兽 共 患 病 学 报 ChineseJonrna1ofgoonoses 367 文章编号 ：1002—2694(2010)04—0367—03 不同PCR方法检测布鲁菌阳性样本的敏感性分析* 甄 清 ，高丽娜 ，马 琳 ，郭 飞。，常 琳 ，张 慧 ，于雅琴 ，孙英杰 摘 要 ：目的 利用布 鲁菌分离株及对应 的患者血液样本验证 不同引物扩增 的特异 性及 其敏 感性 ，为将 PCR方法应用于 人布鲁菌病临床诊断提供参考 。方法 对血液样本进行传统布鲁菌分离培养 ，根据表型对分离株进行种型鉴定；用玻片凝集 试验 (PAT)和试管凝集试验 (SAT)两种血清学方法检测培养 阳性 的血液模板 ；应用不同布鲁菌属 引物 B4／B5、BP26以及 羊、 牛和猪种 引物对布鲁菌分离株进行鉴定，同时对其血液模板进行 PCR检测。结果 从急性发热患者血液分离到 24株布鲁 菌 ，经表 型鉴定均为羊种 。对分离株进行 PCR鉴定 ，布鲁菌属 引物B4／B5、BP26及羊种 引物在分离株 中均扩增到 目的条带。 应用不 同引物 PCR方法对血液模板检测 的阳性率依次为 B4／B5(79．17 )，羊种 (66．67 )和 BP26(25．00 )；B4／B5和羊种 引物扩增 同为阳性 的符合率为 41．67 ，B4／B5或羊种 引物扩增为 阳性 的符合率为 9】．67 。结论 在布鲁菌分离培养 阳性 的血液样本 中，应用单一 引物 ICR进行 人布 鲁 菌病 诊 断 的敏感 性较低 ，将 布 鲁菌属 B4／B5和地 方 流行种 引物 结合 可提 高 PCR检 测方法的敏感性和特异 性。 关键词 ：PCR；布鲁菌 ；分离培养；血液样本 中图分类号 ：R378．5 文献标识码 ：A Sensitivityanalysison differentPCR assaysforBrucella detection ZHENQing，GA()Li—D_a，MALin，GUo Fei，CHANG Lin，ZHANG Hui，YU Ya—qin，SUN Ying—jie (S(hoolo／PublicHealth，JilinUniversity，Changchun 130021，China) ABSTRACT：]rotestthesensitivity and specificity ofdifferentPCR primerswith Brucella strainsandcultured—positive bloodsamples．theconventionalculturemethodandstraingenotypingforBrucella wereconducled．BothPlateAgglutination Test(PAT)andStandardAgglutinationTest(SAT)werealso usedforidentification．Brucella isolatesandbrucellosispa— tients’bloodsampleswereidentifywithPCR primersB4／B5，BP26，B．Melitensis，B．Abortus，andB．Suis，respectively． Andthe24 isolatesfrom thebloodofpatientswithfeverinacutephaseweregenotypedasB．M elitensis．Targetbandswere obtainedinallidentificationsoftheseisolatesbyPCRwithprimersB4／B5，BP26，andB．Melitensis，respectively．Theposi— tivecoincidenceratesofbloodsampleswere79．17 (B4／B5)，66．67 (B．Melitensis)and25．00 (BP26)，respectively． ThepositivecoincidencerateofB4／B5andB．Melitensiswas41．67V0，andthepositivecoincidencerateofB4／B5orB． M