高、低密度脂蛋白胆固醇的匀相测定.docVIP

高、低密度脂蛋白胆固醇的匀相测定法及技术要求 『 摘　要 』： 近些年来，国内外相继研制开发出一些新型高、低密度脂蛋白胆固醇（HDL-C/LDL-C）HDL-C、LDL-C的直接匀相测定法（homogeneous methods）试剂。如测定HDL-C用的选择性抑制法（PPD法），PEG修饰酶法（PEGME法），清除法（Clearance method）包括反应促进剂-过氧化物酶清除法（SPD法）和过氧化氢酶清除法（CAT法），免疫分离法（IS法）包括PEG/抗体包裹法（IRC法）和抗体免疫分离法（AB法）；测定LDL-C用的表面活性剂清除法（SUR法），过氧化氢酶清除法（CAT法），杯芳烃法（CAL法），可溶性反应法（SOL法）和保护性试剂法（PRO法）。这些方法因其简便、快速，易于自动化，已引起关注并广泛应用于临床常规分析。本文对HDL-C、LDL-C的测定方法进行了回顾，并重点介绍了各种匀相测定法的检测原理，以及临床测定时的技术要求。 『 关键词 』： 高密度脂蛋白胆固醇 低密度脂蛋白胆固醇 匀相测定法 　　众多流行病学与临床研究证实，动脉粥样硬化、冠心病的发生率与血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平呈负相关，而与低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平呈正相关。近年来国内外相继研制开发出一些新型HDL-C、LDL-C的直接测定方法即匀相测定法(homogeneous methods)试剂，因其简便、快速，易于自动化，已引起关注并广泛应用于临床常规分析。 　　1 HDL-C检测方法 　　1.1 概述 测定血清HDL-C通常需根据各种脂蛋白的密度、颗粒大小、电荷等应用超速离心法、色谱法、电泳法、化学或免疫沉淀法将HDL与其他脂蛋白分离开，测定HDL组分中胆固醇含量。美国疾病控制与预防中心(CDC)测定HDL-C的参考方法为超速离心法，也为NCEP所推荐。CDC胆固醇参考方法实验室网络(CRMLN)近来选用了一种“指定的比较方法”(DCM法)作为转移CDC参考方法准确性的适用方法—硫酸葡聚糖-镁(DS50-Mg2+)沉淀结合ALBK法。色谱法和电泳法因仪器、操作要求高等种种原因临床常规实验室也较少应用，多用于脂蛋白的研究。 　　国外把临床常规实验室直接分离测定HDL-C的方法分为3代。第1代为化学沉淀法，常用的沉淀剂为多阴离子，如磷钨酸(PTA)、DS、肝素或非离子多聚体如聚乙二醇与某些二价阳离子(如Mg2+、Ca2+、Mn2+)合用。最早为美国国立卫生研究院(NIH)所采用的肝素-锰沉淀法，后多采用DS50-Mg2+法，欧洲则多采用磷钨酸镁沉淀法(PTA-Mg2+法)和聚乙二醇沉淀法(PEG法)。但此类方法受高甘油三酯(TG)的影响。第2代采用简便的磁珠DS-Mg2+分离法(美国Reference Diagnostics和Polymedco 公司试剂)，省去了离心步骤，但需特殊装置，试剂不适于推广应用。第3代为匀相测定法，标本用量少，不需沉淀处理，可用于自动生化分析仪测定，在准确度和精密度方面基本达到NCEP 的分析目标，因此在短短的数年里迅速被临床实验室采用。国内情况与国外有些不同，也可分为3代。第1代为电泳法；第2代为化学沉淀法，1995年中华医学会检验分会曾在国内推荐PTA-Mg2+法作为HDL-C测定常规方法；第3代为目前广泛使用的匀相测定法。 　　1.2 匀相测定法 　　1.2.1 选择性抑制法(polyanion polymer/ detergent HDL-C assay，PPD法) 亦称选择性遮蔽法。其应用两种不同的表面活性剂及多聚阴离子，根据脂蛋白的酶反应选择性，直接测定HDL-C。该方法的主要代表试剂盒为日本第一化学(Daiichi pure chemicals Co.)Cholestest HDL和美国Genzyme Diagnostics公司的N-genousTMHDL-C试剂盒。主要反应式如下： 　　 　　1.2.2 PEG修饰酶法(PEG-modified enzyme HDL-C assay，PEGME法) 在Mg2+的存在下，α-环糊精硫酸盐与CM、VLDL、LDL形成可溶性复合物。这些复合物能抵抗变构酶 的作用；PEG6000或葡聚糖右旋糖苷与CHER和CHOD共价结合，引起酶的变构，变构酶对脂蛋白的大小和/或电荷具有选择性，其顺序依次为LDL＜VLDL≈CM＜HDL。而a-环糊精硫酸盐能限制CM、VLDL颗粒进入环状的环糊状结构，从而避免酶的催化作用，这种作用还与Mg2+浓度有关。因此在Mg2+及少量DS 存在的前提下，可直接测定HDL-C。主要代表性试剂盒有日本协和(Kyowa Medex Co.)、罗氏诊断(Roche Diagnostics)和德国Centroni