细菌培养基的制备、灭菌及接种和培养技术.ppt

* 实验程序1（细菌的纯种分离——平板划线法） * 实验程序2（细菌的接种技术） 接种方法：常用的有斜面接种法、平板接种法、液体接种法、试管深层固体培养基的穿刺接种法。 接种工具：常用的有接种针、接种环、接种钩、接种圈、接种铲或接种锄、玻璃涂棒等。 图－6 * 实验程序2（细菌的接种技术——斜面接种法） ① 左手平托两支试管，拇指压住两支试管。外侧是菌种试管，内侧是待接种的空白斜面(两支试管的斜面同时向上) 。右手将棉塞旋松，以便在接种时容易拔出。 ② 右手拿接种环，在火焰上先将环端烧红灭菌，然后将有可能伸入试管的其余部位也过火灭菌。 ③ 将两支试管的上端并齐，靠近火焰，用右手小指、无名指和手掌将两支试管的棉塞一并夹住拔出，棉塞仍夹在手中，然后让试管口缓缓过火焰。 1 2 3 * 实验程序2（细菌的接种技术——斜面接种法） ④ 将已灼烧过的接种环伸入菌种试管内。先冷却，而后再用环挑取少许菌种，将接种环抽出并迅速伸入待接种试管底部，在斜面上由底部向上划线。抽出接种环，塞上棉塞将试管插在试管架上，最后再次烧红接种环，则接种完毕。 4 5 6 7 8 * 实验程序2（细菌的接种技术——液体接种和穿刺接种） 液体接种法(从斜面菌种接入培养液)：用接种环挑取斜面菌种送入培养液中，使环在液体表面与管壁接触轻轻研磨，将环上的菌种全部洗入培养液中，取出接种环塞上棉塞。将试管轻轻撞击手掌使菌体在培养液中均匀分布。最后将接种环烧红灭菌。 穿刺接种法(从斜面菌种接入(半)固体培养基)：用接种针经火焰灭菌后，挑取少量菌种，垂直地穿入试管固体培养基中心至底部，然后穿刺线缓慢将针抽出，塞上棉塞。烧红接种针灭菌，则接种完毕。 * 实验程序2（细菌的接种技术——稀释平板涂布法） 稀释样品：方法同稀释平板分离法 倒平板：将融化并冷至50℃左右的培养基倒入无菌培养皿中，冷凝后即成平板 用无菌移液管吸取一定量的经适当稀释的标志样品液于平板上，换上无菌玻璃刮刀在平板上旋转涂布均匀 将培养皿正摆在恒温箱中，调节一定温度进行培养。如果培养时间较长，次日把培养皿倒置继续培养，直至长出菌落。 * 实验程序2（细菌的接种技术） 液体培养基中的菌种接入液体培养基中 接种工具：无菌移液管和无菌滴管 移液管和滴管不能在火焰上烧，应预先灭菌 用无菌移液管自菌种管中吸取一定量的菌液接到另一管液体培养基中，将试管塞好棉塞即可。 * 实 验 二 结 束 * 实 验 三 细菌培养基的配制、灭菌及接种和培养技术 * 第一部分细菌培养基的制备、灭菌 目的要求 实验材料 实验程序 * 目 的 要 求 熟悉玻璃器皿的洗涤和灭菌前的准备。 掌握培养基和无菌水的制备方法。 掌握高压蒸气灭菌技术。 * 实 验 材 料 药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、蒸馏水等。 高压蒸气灭菌锅、烘箱、细菌过滤器、酒精灯。 其它：培养皿、试管、移液管、锥形瓶、烧杯、玻璃珠等。 * 实 验 程 序 玻璃器皿的洗涤和包装 培养基的制备 无菌稀释水的制备 培养基和玻璃器材等的灭菌 * 实验程序1 （玻璃器皿的洗涤和包装） 清洗并烘干玻璃器皿：如培养皿、移液管、试管等。 棉塞的制作 包装培养皿和移液管等。 * 实 验 程 序2 （培养基的种类） 据组成成分可分为: 1.合成培养基：由各种纯化学物质按一定比例配制而成。 2.半合成培养基：有一部分纯化学物质和另一部分天然物质配制而成。 3.天然培养基：利用天然来源的有机物配制而成。 从培养基的物理状态可分为 1.液体培养基：不加凝固剂的液体状态培养基。 2.固体培养基：在液体培养基中加入15～30g/L左右的琼脂。 3.半固体培养基：在液体培养基中加入3～5g/L左右的琼脂。 * 实 验 程 序2 （培养基的种类） 常用凝固剂为琼脂（其次为明胶），又叫洋菜、冻粉。 * 实 验 程 序2（培养基的配制方法和