高中基因工程_典型例题.docVIP

关于酶切的几道题： 1. (08江苏生物将动物致病菌的抗原基因导入马铃薯制成植物疫苗，饲喂转基因马铃薯可使动物获得免疫力。以下是与植物疫苗制备过程相关的图和表。 请根据以上图表回答下列问题。 （1）在采用常规PCR方法扩增目的基因的过程中，使用的DNA聚合酶不同于一般生物体内的DNA聚合酶，其最主要的特点是 。 （2）PCR过程中退火（复性）温度必须根据引物的碱基数量和种类来设定。表1为根据模板设计的两对引物序列，图2为引物对与模板结合示意图。请判断哪一对引物可采用较高的退火温度？__________。 （3）图1步骤③所用的DNA连接酶对所连接的DNA两端碱基序列是否有专一性要求？ 。 （4）为将外源基因转入马铃薯，图1步骤⑥转基因所用的细菌B通常为 。 （5）对符合设计要求的重组质粒T进行酶切，假设所用的酶均可将识别位点完全切开，请根据图1中标示的酶切位点和表2所列的识别序列，对以下酶切结果作出判断。 ①采用EcoRⅠ和PstⅠ酶切，得到_________种DNA片断。 ②采用EcoRⅠ和SmaⅠ酶切，得到_________种DNA片断。 （1）耐高温 2）引物对B （3）否 （4）农杆菌 （5）①2 ②12、(08海南 图为某种质粒表达载体简图，小箭头所指分别为限制性内切酶EcoRI、BamHI的酶切位点，ampR为青霉素抗性基因，tctR为四环素抗性基因，P为启动因子，T为终止子，ori为复制原点。已知目的基因的两端分别有包括EcoRI、BamHI在内的多种酶的酶切位点。 （1）将含有目的基因的DNA与质粒表达载体分别用EcoRI酶切，酶切产物用DNA连接酶进行连接后，其中由两个DNA片段之间连接形成的产物有、、三种。若要从这些连接产物中分离出重组质粒，需要对这些连接产物进行 。 （2）用上述3种连接产物与无任何抗药性的原核宿主细胞接种到含四环的培养基中，能生长的原核宿主细胞所含有的连接产物是 。 （3）目的基因表达时，RNA聚合酶识别和结合的位点是 ，其合成的产物是 。 （4）在上述实验中，为了防止目的基因和质粒表达载体在酶切后产生的末端发生任意连接，酶切时应选用的酶时 。 （1）目的基因—载体连接物 载体--载体连接物 目的基因--目的基因连接物 分离纯化（每空2分，共8分）（其他合理答案也给分） （2）载体--载体连接物（2分）；（3）启动子 mRNA（每空2分，共4分） （4）EcoRI和BamHI（2分）（只答一个酶不给分）SalⅠ、HindⅢ、BamH I（1）将含有目的基因的DNA与质粒分别用I酶切，酶切产物用连接后，两个DNA片段连接 种。SalⅠ、HindⅢ4．（1）质粒和tPA基因（载体和目的基因） 质粒或tPA基因（载体或目的基因）自身连接 DNA连接 重组载体（重组DNA） （2） （3）标记基因 胸苷、甘氨酸、嘌呤 氨甲喋呤 选择 （4）tPA（组织型纤维酶原激活剂） 关于筛选 5.（2010届海淀零模）多聚半乳糖醛酸酶（PG）能降解果胶使细胞壁破损番茄果实成熟中PG合成显著增加，使果实变红变软，不利于保鲜。利用基因工程方法减少PG的表达，延长果实保质期。将PG基因反向接到Ti质粒上导入到细胞中，得到转基因。请据图回答： （1）mRNA，通过 获取PG基因基因上游加结构A确保基因的转录结构A上具有 结合位点得到基因两侧人工合成BamHI黏性末端。已知BamHI的识别序列请画出目的基因黏性末端 ③重组质粒转化到大肠杆菌中的目的是 。（）农杆菌感染原生质体，用筛选培养基中 。培养2448h后取样，在质量分数为25%的蔗糖溶液中，观察细胞 现象来鉴别细胞壁是否再生。（）由于导入的目的基因能转录反义RNA，与互补结合制基因表达。若转基因的保质期比非转基因 ，确定转基因成功。 （）转基因种子不一定保留目的基因，科研人员常采用方法保转基因优良性状。’----UCCCG----5’ 启动子5’----AGGGC----3’ 启动子3’----TCCCG----5’ 反义基因 转录出反义mRNA序列3’----CGGGA----5’ 启动子5’----GCCCT----3’ 启动子3’----CGGGA----5’ 6.科学家将外源目的基因与大肠杆菌的质粒进行重组，并在大