植病研究技术重要试题.docVIP

列出几种常用的血清学检测技术 植物病原细菌鉴定的主要有哪几方面的依据 植物病毒病的鉴定是否需要遵循科赫尔法则？如何获得生物分离物 简要介绍气流传播的真菌病害常用的接种方法有哪些 请叙述5种以上基于PCR原理的延伸技术 巢式PCR 是一种变异的聚合酶链反应(PCR)，使用两对（而非一对）PCR引物扩增完整的片段。第一对PCR引物扩增片段和普通PCR相似。第二对引物称为巢式引物（因为他们在第一次PCR扩增片段的内部）结合在第一次PCR产物内部，使得第二次PCR扩增片段短于第一次扩增。巢式PCR的好处在于，如果第一次扩增产生了错误片断，则第二次能在错误片段上进行引物配对并扩增的概率极低。因此，巢式PCR的扩增非常特异 反转录PCR （Reverse Reaction，RT-PCR）又称为逆转录PCR。其原理是：提取组织或细胞中的总RNA，以其中的mRNA作为模板，采用Oligo(dT)或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。多重PCR 一般PCR仅应用一对引物，通过PCR扩增产生一个核酸片段，主要用于单一致病因子等的鉴定·多重PCR(multiplex PCR)，又称多重引物PCR或复合PCR，它是在同一PCR反应体系里加上二对以上引物，同时扩增出多个核酸片段的PCR反应，其反应原理，反应试剂和操作过程与一般PCR相同·重组PCR将两个不相邻的DNA片段重组在一起的PCR称为重组PCR。其基本原理是将突变碱基、插入或缺失片段、或一种物质的几个基因片段设计在引物中，先分段对模板扩增，除去多余的引物后，将产物混合，再用一对引物对其进行PCR扩增。所得到的产物是一重组合的DNA。中心法则(genetic central dogma)，是指遗传信息从DNA传递给RNA，再从RNA传递给蛋白质，即完成遗传信息的转录和翻译的过程。也可以从DNA传递给DNA，即完成DNA的复制过程。这是所有有细胞结构的生物所遵循的法则。 14. 植物细菌病害的症状有何特点、 症状：细菌病害症状主要有：腐烂。由于细菌分泌的果胶酶的分解作用而使受害植物的根、茎、块根、块茎、果实、穗等肥厚多汁器官的细胞解离、组织崩溃腐烂，如白菜软腐病。坏死。主要发生在叶片和茎杆上,出现各种不同的斑点或枯焦，前者如棉花角斑病,后者如水稻白叶枯病。萎蔫。因细菌寄生在维管束内堵塞导管或因细菌毒素而引起，如青枯病。肿瘤。由于细菌刺激，使寄主细胞增生、组织膨大而形成，如癌肿病。黄化矮缩。在木质部寄生的细菌使植株表现黄化、萎缩，如葡萄皮尔氏病、杏叶焦病、苜蓿矮化病、甘蔗矮化病和桃幼果病等。 真菌 1. 培养基类型--①天然：组成复杂，无法了解成分；大多真菌生长良好，易产孢②半组合：适宜大多真菌分离、培养和一般性研究③组合：研究微生物的生理、生化特点 2.灭菌和消毒方法--①热力灭菌(干热灭菌—160-170℃,2-3h/湿热灭菌：包括巴氏灭菌--短时、中高温，间歇灭菌--常压灭菌，高压蒸汽灭菌--121℃,20～30 min, 靠蒸汽的高温而不是压力。效率远高于干热灭菌；适用多种材料) ②过滤灭菌 ③辐射消毒法(紫外辐射灭菌：240-280,253,穿透力较差，适用于小范围空气灭菌; 电离辐射：γ－射线、x－射线等，一般不用于实验室。) 3.消毒：用物理或化学方法杀死物体上的大部分微生物，以防侵染；不能消灭所有的微生物。灭菌：用物理或化学方法完全除去或杀灭器物表面和内部的一切微生物。 区别：灭菌常采用物理方法，消毒多采用化学方法；灭菌结果是物品上没有一个活的微生物存在，物品处于无菌状态，消毒后物品处于有菌状态 4.常规表面消毒:70％酒精浸十几秒--0.1％升汞溶液浸1-2min--无菌水冲洗2~3次 5.土壤中特定植物病原真菌的分离:①土壤稀释法分离植物病原真菌②诱饵法③埋管法--分离土壤习居菌④过筛法--分离菌核 6.菌种保存的原理：采用低温、冷冻或缺氧等方法，中止病原真菌的生长和繁殖，降低代谢强度，使之处于休眠或假死状态。①斜面室温保存法(方便、易操作;菌种易干燥、失活)②斜面低温保存法(方便、易操作;菌种易失活)③矿物油保存法：常用液体石蜡④灭菌水保存(方便;适用于很多真菌;可保存多年，菌种不易退化和变异)⑤冷冻干燥保存--适于保存大多数产孢真菌，效果很好；不适用鞭毛菌或只产生菌丝体的真菌⑥其它--土壤中保存、干燥保存 7.病原真菌致病性 直接鉴定法-直观，结果较准确、可靠；工作量大，不适于初选 间接鉴定法-快速；一次可处理大量样品；适宜于大量菌株的初选；可靠性稍差 8.土传病害接种方法--①土壤接种法-接种时由于加入大量有机质，影响结果。可直接把病原菌液体培养，然后把菌丝体拌入土壤②蘸根接种法-适宜许多根茎部侵染的病害;避免土壤接种的缺点③根部切伤接种法④嵌入法接种-茎