2012生化-2-蛋白质.pptVIP

第二章蛋白质Protein 一. 20种天然氨基酸的结构特点　 氨基个数、位置、异构 　氨基都连在α- C上，即都是α-氨基酸 　除甘氨酸外，都具旋光性 　皆为L-型氨基酸 不带电: Ser、Thr、Asn、Gln、 Tyr、Cys、(Gly) 带正电: His、Lys、Arg 带负电: Asp、Glu 　　　　　波长 (紫外) ελmax 酪氨酸　　　278nm 1.1×103 色氨酸 279nm 5.2×103 苯丙氨酸 259nm 2.0×103 特点： a. pH=pI,AA处于等电点,溶解度最小(分离提纯) 　pHpI,静电荷为负,电场中向阳极移动 　pHpI,静电荷为正,电场中向阴极移动 b.α-COOH的解离度α-NH3+的解离度 c. pI的确定 根据pK求pI 例：求Leu的pI 解：把Leu看成多元酸，写出解离方程 等电点时,净电荷为零,即[Leu+]=[Leu-],pH=pI 即　AA的pI等于该AA两性离子状态两侧基团pK值之和的一半 　一氨一羧型(中性)： pI~6(5.07~6.30) 　一氨二羧型(酸性)： pI较小(Asp2.77,Glu3.22) 　二氨一羧型(碱性)： pI较大(His7.59,Lys9.74, Arg10.76) AA的α-COOH与Zn2 +、 Ca2+ 、 Mg2+ 、 Cu2+等 反应,生成络合物(难溶) 书写 N→C　 　 a. 一级结构决定二级结构 无氢键就无二级结构 肽链一级结构中AA的组成及排序决定能否形成氢键(Pro和Gly不能形成氢键) 2. 一级结构决定高级结构(功能)不是绝对的 一些明显不同的AA顺序, 都能产生基本相同的三、四级结构, 且不影响功能 再如: 胰岛素A链第8、9、10位, B链第30位AA, 猪、牛、羊、马有差异, 但未影响空间结构和活性 2. 渗透压法 　根据稀溶液的依数性 M=g·R·T/Π·V 5. 超速离心法 　1940年, Svedberg设计 置蛋白质于25~50万倍重力场的离心力下, 使蛋白颗粒从溶液中沉降下来→光学系统观察旋离过程颗粒的沉降行为并记录→得沉降速度→求M pI: 净电荷为零时溶液的pH 流程: 纯品→测Mr→解离各亚基→测AA组成→测末端→拆二硫键→特异裂解→分离提纯小肽并测序→拼接→确定二硫键位置 4. AA组成测定 6mol/LHCl, 110℃水解24h, 自动分析仪测定 5. 末端测定 　N-末端测定 a. DNFB(DNS-Cl)法 c. 氨肽酶法 C-末端测定 a. 肼解法 分离, 进一步鉴定 据估计地球上存在1011种蛋白质 共价键 次级键 作用力 肽键 一级结构 氢键 二硫键 二、三、四级结构 疏水键 盐键 范德华力 三、四级结构 三. 维持蛋白质构象的力 ＊三级结构也含二硫键 四. 结构与功能的关系 一级结构 → 高级结构 → 功能(非绝对) 为什么？ 1.一级结构诸因素(AA组成、连接、排序)不同程度的变化将导致空间结构及生物学活性的改变 例　镰刀型贫血病(分子病: 一级结构与正常有所不同的遗传病) 决定 决定 正常血红蛋白分子2条α链(141×2)+2条β链(146×2)共574个AA组成, β链第6位AA被取代(2/574), 致病 红血球缺O2时, 呈镰刀状, 易胀破溶血 β-链 1 2 3 4 5 6 7 Hb-A Val-His-Leu-Thr-Pro-Glu-Lys… Hb-S Val-His-Leu-Thr-Pro-Val-Lys… Val 取代Glu 含氧-HbA O2 O2 粘性疏水斑点 含氧HbS 脱氧HbS 疏水位点 血红蛋白分子凝集 b. 一级结构决定三、四级结构 　三级结构在二级结构基础上产生, 主要靠亲　　　水、疏水侧链基团及次级键相互作用盘绕而成 四级结构为多亚基的装配, 当一级结构上带这些侧链基团的AA发生缺失、增加或替换时, 就会影响这些基团相互吸引和排斥, 以及次级键的形成, 从而影响肽链盘绕曲折的正确性 例: 牛胰核糖核酸酶的变性与复性 随机几率: 8个-SH形成4个-S-S-, 共有105种方法 脊椎动物细胞色素c由104个AA组成, 其中35个AA不变(Cys14 、Cys17与血红素共价键