区带毛细管电泳法测定中药槐米中芦丁的含量.docVIP

综合实验 实验名称：区带毛细管电泳法测定中药槐米中芦丁的含量 班级：化学学院10级（2）班 姓名：李宴轲 学号实验目的 初步掌握毛细管电泳法的原理 掌握毛细管电泳仪和微波辅助萃取装置的使用方法 掌握中草药定量分析的基本过程及方法 实验原理 毛细管电泳法(CE)，又叫高效毛细管电泳（HPCE）。CE统指以高压电场为驱动力，以毛细管为分离通道，依据样品中各组分之间的淌度和分配行为上的差异而实现分离的一类液相分离技术。 图1、高效毛细管电泳仪示意图 毛细管电泳的突出特点是： 毛细管电泳的仪器简单、操作简便，容易实现自动化 分析速度快，分析效率很高 操作模式多，分析方法开发容易 实验成本低、消耗少 应用范围极广 仪器及试剂 仪器 高效毛细管电泳仪 微波消解系统 色谱工作站 台式离心机 试剂 槐米，芦丁标准品，无水乙醇，硼砂，NaOH,二次蒸馏水 实验步骤 1、样品溶液制备 草药槐米经烘干、粉碎，过40目标准筛。准确称取0.10g粉末于微波消解罐的内套中，加入10mL乙醇，将内套放入消解罐外套中，整个消解罐在密闭的状态下置于微波萃取装置中，在控制温度100C°的条件下，萃取2min。萃取结束后，待消解罐冷却至室温后开罐，萃取液经过抽滤出去固体后，用无水乙醇定容至25mL。 2、缓冲溶液配置 （1）准确称取Na2B4O7·10H2O固体9.5343g，在100mL的烧杯中用二次水溶解（需水浴加热），待固体全部溶解并冷却至室温后，定容至250mL，即得到0.1ml/L的Na2B4O7溶液。 （2）用移液器取0.1mol/L的Na2B4O7溶液200μL用二次水稀释配置成10mmol/L的溶液2mL，稀释两份，置于2mL离心管中，用作电泳缓冲溶液。 3、毛细管电泳仪的操作要领 （1）开机预热20min。使用前须依次用二次水冲洗5min，0.1mol/LNaOH溶液冲洗5min，二次水冲洗5min （2）设定工作温度25C°。 （3）每次电泳前，须用二次水冲洗2min，再用0.1mol/LNaOH溶液，二次水冲洗2min，再用缓冲溶液冲洗2min。 （4）本实验的进样条件为0.5psi压力，10s时间。 （5）电泳运行条件为20KV，20min，在启动高压的同时，色谱工作站的记录系统也触发开始。 （6）电泳结束后，在计算机的色谱工作站软件内保存好色谱图，记录峰面积。 （7）实验结束对仪器进行冲洗，依次用二次水冲洗2min，0.1mol/LNaOH溶液冲洗2min，二次水冲洗2min，0.1mol/LNaOH溶液冲洗5min，二次水冲洗5min，0.1mol/LNaOH溶液冲洗10min，二次水冲洗10min。 4、槐米中芦丁含量测定 （1）取槐米样品溶液200μL，置于2mL离心管中，加入40μL的0.1ml/L的Na2B4O7溶液和1760μL二次水，扣紧离心管盖子，摇匀并在离心管上做标记。 （2）将装有配置好的样品溶液和缓冲溶液的2mL离心管放入离心机中，在4000rpm的转速下离心脱气5min。 （3）离心后得到10mmol/L的Na2B4O7溶液即为本实验的运行缓冲溶液，做标记的样品溶液即为电泳仪可检测的样品溶液。 （4）照前述电泳条件测定该样品溶液，得到谱图保存并打印。 数据处理 1、绘制标准曲线。 得到标准曲线方程：Y=97+2099X(μg/mL) 2、从待测样品谱图中，根据峰保留时间确定芦丁峰，记录该峰的峰面积，从标准曲线上查得对应的浓度值。经过计算得出中药槐米中的芦丁质量百分含量。 根据待测样品谱图和芦丁的标准电泳曲线的对比，得出芦丁峰的保留时间9.650s，该峰的峰面积为31811。 根据标准曲线方程Y=97+2099X(μg/mL)得出待测样品中芦丁的浓度为Y=15.11（μg/mL），计算得到样品中芦丁的质量为3.777mg，由于我们所取的槐米的样品质量为0.1015g，因此计算得到中药槐米中的芦丁质量百分比为3.721% 思考题 1、简要说明毛细管电泳法（CE）同液相色谱法（LC）的区别与联系。 答：CE和HPLC相比, 其相同处在于都是高效分离技术, 操作均可自动化, 且有多种不同分离模式。差异在于：（1）CE用迁移时间取代HPLC中的保留时间, CE的分析时间通常不超过30min, 比HPLC速度快；其他分离存在两相，电泳是均相。（2）对CE而言,理论塔板高度和溶质的扩散系数成正比, 对扩散系数小的生物大分子而言, 其柱效高。（3）CE所需样品为nl级, 最低可达270 fl, 流动相用量也只需几毫升, 而HPLC所需样品为μl级, 流动相则需几百毫升乃至更多；但CE仅能实