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关于鲎试剂在细菌内毒素检查法中使用的探讨 鲎试验因其简单﹑快速﹑灵敏﹑准确的特点，被世界各国广泛采用，中国药典和欧美药典将其定为法定的细菌内毒素检查法，大范围地替代了热源检查法。为了确保其检查结果的准确性，本文对鲎试剂的使用进行了探讨，以规范鲎试剂的正确使用。 【关键词】? 鲎试剂;细菌内毒素检查法 　【Abstract】 TAL reagent test because of its simple, fast and accurate characteristics was widely adopted around the world. Chinese Pharmacopoeia, European and the United States Pharmacopoeia set it as the statutory bacterial endotoxins test, replaces the pyrogen test on a large scale. In order to ensure the accuracy of test results, the main discussion of this paper is the use of tachypleus tridentatus leach(TAL),to regulate the proper use of TAL. 　　【Key words】 TAL;bacterial endotoxins test 　　1 鲎试剂的分类 　　鲎试剂是从栖生于海洋的节肢动物“鲎”的蓝色血液中提取变形细胞溶解物，经低温冷冻干燥而成的生物试剂，专用于细菌内毒素检测。 　　1.1 按原料来源分 一种是由美洲鲎血液提取的称美洲鲎试剂(Limulus Amebocyte Lysate)，缩写为LAL，由美国生产;另一种是由东方鲎血液中提取的称东方鲎鲎试剂(Tachypleus Amebocyte Lysate)，缩写为TAL。TAL与LAL有相同的功效。 　　1.2 按实验方法分 细菌内毒素检查法包括两种方法，即凝胶法和光度测定法，后者又包括浊度法和显色基质法[1]。则鲎试剂可分为：凝胶法鲎试剂、动态浊度法鲎试剂、终点浊度法鲎试剂、动态显色法鲎试剂和终点显色法鲎试剂。 　　凝胶法鲎试剂通过与内毒素产生凝集反应的原理来定性检测或半定量内毒素的方法。 　　动态浊度法鲎试剂、终点浊度法鲎试剂、动态显色法鲎试剂和终点显色法鲎试剂则都是定量检测内毒素的。 　　1.3 按使用特点分 　　1.3.1 普通鲎试剂 灵敏度0.5～0.125EU/ml，适用于仅需要检测内毒素限量的样品。 　　1.3.2 高灵敏度鲎试剂 灵敏度0.06～0.015 EU/ml，适用于内毒素限量较低的样品细菌内毒素检查。 　　1.3.3 特异性鲎试剂 灵敏度0.5～0.015EU/ml，适用于成分较为复杂，会对鲎试剂产生干扰的样品[2]。 　　1.3.4 定量法鲎试剂 最低检测限0.03～0.005 EU/ml，适用于需要对内毒素进行定量测定的样品。 　　2 鲎试剂在细菌内毒素检查法中的正确使用 　　内毒素检查法结果准确与否与所用鲎试剂的灵敏度相关性很大[3]，而鲎试剂的灵敏度与它的正确使用又密切相关。所以，一定要严格执行鲎试剂的质量标准，规范使用鲎试剂。 　　2.1 保证所使用鲎试剂的质量 鲎试剂的质量主要表现在其灵敏度、自凝时间与成胶状态三个方面：灵敏度稳定;自凝时间不低于24h[4];具有一定的缓冲能力与合适的pH;反应后即形成坚实凝胶，将成胶安瓿翻转180°而不会被破坏。而质量稍差的鲎试剂存放一定时间后(如半年)其灵敏度可能发生变化，而灵敏度的改变会使测定结果所反映的供试品中内毒素的允许限值发生变化[5]。因此，需选择具有国家颁发的批准文号,质量稳定的鲎试剂。 　　2.2 对鲎试剂灵敏度进行监测性复核 由于不同厂家鲎试剂质量不尽相同，即便是相同厂家不同批号的鲎试剂也有差异,这便导致鲎试剂灵敏度复核值与标示值不尽一致，因此鲎试剂的复核值对检测结果有显著影响[6]。每使用新批号鲎试剂时应复核其灵敏度;对留样鲎试剂自生产之日起，每6个月进行一次灵敏度检测，其灵敏度在有效期内应符合规定。有研究表明，鲎试剂的灵敏度在符合标准规定及适当的贮存条件下,3年内其灵敏度变化不大，是稳定的。建议可适当延长其有效期[7,8]。因此，对鲎试剂灵敏度进行监测性复核有利于确保实验的准确性，同时可以最大程度地使用鲎试剂。 　　2.3 使用过程正确操作 选择合适的操作方法与顺序，在鲎试剂的使用过程中尤为重要。在操作过程中要注意以下几点：(1)实验室要求洁净、无尘埃流通;检验人员同时注意卫生的保持。在整个使用操作过程中应防止微生物的污染，例如空