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姜黄素与STI571联合及序贯给药对K562细胞增殖的影响_医学论文 姜黄素与STI571联合及序贯给药对K562细胞增殖的影响_医学论文 【摘要】 目的研究姜黄素(Cur)与STI571联合应用对慢性粒细胞白血病(CML)细胞株K562增殖的影响,探索两药序贯给药的不同效果。方法锥虫蓝排染计数计算K562细胞增殖抑制率显微镜下观察Cur与STI571联合应用对K562细胞的细胞毒作用锥虫蓝排染法检测药物序贯给药的不同效果金氏公式评价两药的协同效果。结果Cur与STI571单独作用均抑制K562细胞的增殖,二者联合应用呈协同作用(Qgt1.15)显微镜下可见0.4 μmol/L STI571与 5 μmol/L Cur联合应用对K562细胞毒作用强于单独应用先给予STI571作用24 h,再给予Cur作用24 h,对K562细胞的抑制呈协同作用(Qgt1.15),而先给予Cur作用24 h,再给予STI571作用24 h,则呈单独相加或拮抗作用(Qlt1.15)。结论Cur与不同浓度的STI571(0.1~0.4 μmol/L)联合应用可协同抑制K562细胞增殖联合应用STI571和Cur时,先给予STI571再给予Cur比先给予Cur再给予STI571协同效果好。 【关键词】 中草药 姜黄素 K562细胞 白血病 髓样 慢性 药物疗法,联合 慢性粒细胞白血病(chronic myelogenous leukemia,CML)是以费城染色体(Ph)为特征的多潜能干细胞异常的骨髓恶性增殖性疾病。在我国,CML约占各类白血病的15%~20%,仅次于急性粒细胞白血病(AML)和淋巴细胞性白血病(ALL),占慢性白血病的95%[1]。目前针对该病的发病特点所研制的STI571(Gleeve,CGP57148B,imatinib mesylate),具有独特的作用机制和高效的特异性,在临床上被广泛应用。但是,随着该药的广泛应用,其不良反应及耐药问题相继出现。因此,协同用药成为目前研究STI571的一大热点。姜黄素(curcumin,Cur)具有抗肿瘤、抗炎、抗血小板聚集等广泛的药理作用及毒性小等特点[23],与较小剂量STI571(0.1~0.15 μmol/L)联合应用对抑制K562细胞增殖呈单独相加,而与较大剂量STI571(0.2~0.8 μmol/L)可明显协同下调P210bcr/abl和PKC的表达水平[4]。笔者进一步探讨不同剂量的STI571与Cur联合应用对K562细胞增殖的影响及序贯给药产生的不同效果。 1材料与方法 1.1材料 1.1.1药品与试剂姜黄素(上海试剂三厂,批号980825),纯度99%,溶解于二甲基亚砜(DMSO),配成20 mmol/L储存液于-20 ℃储存备用。STI571(瑞士诺华公司)经本研究所萃取、重结晶所得,纯度99%,溶解于DMSO,配成10 mmol/L,于-20 ℃储存备用。 1.1.2细胞株及培养条件人CML细胞株K562(中国科学院上海细胞研究所),培养于含10%小牛血清、1×108 U/L青霉素及100 mg/L链霉素的RPMI 1640培养液,在37 ℃、体积分数为0.05的CO2中培养。细胞接种24 h后进入指数增长期。 1.2方法 1.2.1Cur和/或STI571对K562细胞的影响取指数增长期的K562细胞100 μL[(2~4)×109L-1]加入96孔板中,每个加药组设3个复孔,分别设空白组,Cur 2.5,5,10,20 μmol/L,STI571 0.1,0.2,0.4,0.8,1.6,3.2 μmol/L的单独作用浓度以及STI571 0.1,0.2,0.4 μmol/L与Cur 5 μmol/L联合作用浓度,给药后各孔终体积相同。将培养板置于37 ℃、体积分数为0.05的CO2培养箱中培养,24 h后用锥虫蓝排染计数，计算抑制率。 抑制率=[(空白组-实验组)/空白组]×100% 1.2.2Cur和/或STI571对K562细胞的细胞毒作用取指数增长期的K562细胞100 μL[(2~4)×109L-1]加入96孔板中,每个加药组设3个复孔,分别设空白组,Cur 5 μmol/L,STI571 0.4 μmol/L单独作用浓度以及二者联合作用浓度,给药后各孔终体积相同。将培养板置于37 ℃、体积分数为0.05的CO2培养箱中培养,24 h后显微镜下观察细胞的存活情况。 1.2.3序贯给药取指数增长期的K562细胞100 μL[(2~4)×109L-1]加入96孔板中,每个加药浓度设3个复孔,分别设空白、Cur 5,10 μmol/L、STI571 0.05,0.1,0.2,0.4 μmol/L的给药浓度，给药后各孔终体积相同。药物联合作